[发明专利]一种利用转基因不定根繁殖根结线虫的方法无效
| 申请号： | 201010113861.2 | 申请日： | 2010-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN101899470A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 向太和;孟莎莎;王琳 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06;A01K67/033 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 转基因 不定根 繁殖 线虫 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用转基因不定根繁殖根结线虫的方法，所述方法包括：
(1)用发根农杆菌K599侵染带有伤口的黄瓜子叶，侵染后的黄瓜子叶于含乙酰丁香酮25mg/L的MS培养基中共培养2～3天后，用含头孢霉素500mg/L的MS培养基清洗，再转入含卡那霉素50mg/L+头孢霉素500mg/L的MS培养基中进行诱导培养，诱导出的不定根经除菌和繁殖，获得转基因不定根于MS培养基中繁殖保存；
(2)分离根结线虫的卵囊，经消毒后接种至培养于MS培养基中的转基因不定根上，于20～25℃下进行培养30～50天，在形成的根结中获得根结线虫。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)方法如下：番茄苗接种根结线虫培养40～50天后，挑取根上的根结线虫卵囊，用0.1％升汞消毒5min，无菌水清洗后，接种至转基因不定根进行培养。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述发根农杆菌K599为野生型发根农杆菌K599或重组发根农杆菌K599，所述重组发根农杆菌K599含有下列之一的质粒：(1)pBIN-35S-GFP、(2)pBI121、(3)pCAMBIAL300、(4)pCHS、(5)pKH200。
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