[发明专利]肠炎沙门氏菌的PCR检测方法、核酸及引物对有效

专利信息
申请号: 201010113922.5 申请日: 2010-02-25
公开(公告)号: CN101857896A 公开(公告)日: 2010-10-13
发明(设计)人: 史贤明;刘斌;施春雷;何晓华;陈婧 申请(专利权)人: 上海交通大学
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11
代理公司: 上海交达专利事务所 31201 代理人: 王锡麟;王桂忠
地址: 200240 *** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 肠炎 沙门氏菌 pcr 检测 方法 核酸 引物
【权利要求书】:

1.一种肠炎沙门氏菌的PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一,根据肠炎沙门氏菌的基因组DNA中碱基序列如SEQ ID NO:1所示的保守序列设计特异性扩增引物对;

步骤二,提取样品DNA,利用步骤一所得特异性扩增引物对采用PCR法进行扩增;

步骤三,凝胶电泳检测扩增产物,判断样品是否含有肠炎沙门氏菌;

所述判断具体为:检测扩增产物在656bp位置是否存在单一扩增条带,如果存在,则说明样品中含有肠炎沙门氏菌;如果没有,则样品中不含有肠炎沙门氏菌。

2.根据权利要求1所述的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法,其特征是,步骤一中,所述引物对具体为:正向引物的碱基序列如SEQID NO:2所示,反向引物的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。

3.根据权利要求1所述的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法,其特征是,步骤二中,所述PCR法中,PCR检测体系具体为:25μL反应体系具体为,10×PCR反应缓冲液2.5μL,25mmol/L的Mg2+2.0μL,2.5mmol/L的dNTP 1.0μL,5μM引物对1μL,Taq酶1U,样品DNA模板溶液2~5μL,最后补水至25μL。

4.根据权利要求1或2或3所述的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法,其特征是,步骤二中,所述PCR法中,PCR检测体系扩增参数具体为:94℃预变性5min,之后开始扩增循环,每个循环的程序为:94℃变性30s,65℃退火30s,72℃延伸30s;循环共35个;循环结束后,72℃延伸10min,降温至12℃,结束。

5.一种根据权利要求1所述的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法中的核酸,其特征在于,该核酸的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

6.一种根据权利要求1所述的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法中的引物对,其特征在于,该引物对具体为:正向引物的碱基序列如SEQ ID NO:2所示,反向引物的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。

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