[发明专利]肠炎沙门氏菌的PCR检测方法、核酸及引物对

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种食品安全检测技术领域的PCR检测方法、核酸及引物对，具体是一种肠炎沙门氏菌的PCR检测方法、核酸及引物对。

背景技术

肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritid)是最常见的沙门氏菌感染类型之一，无宿主特异性而且侵害性非常强，可引起畜禽的胃肠炎及人类肠炎和食物中毒。肠炎沙门氏菌对外界环境的抵抗力较强，在水、牛乳及肉类制品中能生存几个月。肠炎沙门氏菌在自然界分布较广，在许多禽畜和野生动物的肠道中都会储有，其中禽蛋和禽肉是人类感染该菌最主要的传染源。在临床，肠炎沙门氏菌感染的主要病症为发热、恶心、呕吐和腹泻。肠炎沙门氏菌对食品的污染事例日益增多，给我国造成了巨大的经济损失，如1996年向欧洲出口的兔肉中检测到肠炎沙门氏菌，导致全部销毁，直接经济损失达3000万元。目前，肠炎沙门氏菌的检测主要是依靠传统的培养的方法，通过生化反应及血清学测试来鉴定，操作复杂，费时费力，通常要3～5天才能得出检测结果。PCR技术以其操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等特点，逐步应用于肠炎沙门氏菌的检疫工作中。但是，用于肠炎沙门氏菌的PCR检测的靶基因主要是依赖于国外学者的研究，而且许多靶点的特异性不强，如蒋颖，刘轶，郦晓琼等在《扬州大学学报》(农业与生命科学版)2007年第28卷第3期6～8页发表的“肠炎沙门氏菌特异性诊断方法的建立”。文中所用的靶点为sefA基因，该基因存在于许多的D型沙门氏菌中，如伤寒沙门氏菌，以此基因为靶点检测肠炎沙门氏菌易产生假阳性结果。

经对现有技术的文献检索发现，尚未发明与本发明的肠炎沙门氏菌的PCR检测方法、核酸及引物对有关的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种肠炎沙门氏菌的PCR检测方法、核酸及引物对。采用本发明的检测方法检测肠炎沙门氏菌，检测时间短，成本低，检测结果特异性好，结果判定简单。

本发明是通过以下的技术方案实现的：

第一方面，本发明涉及一种肠炎沙门氏菌PCR检测方法，包括如下步骤：

步骤一，根据肠炎沙门氏菌的基因组DNA中碱基序列如SEQ ID NO：1所示的保守序列设计特异性扩增引物对；

步骤二，提取样品DNA，利用步骤一所得特异性扩增引物对采用PCR法进行扩增；

步骤三，凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含有肠炎沙门氏菌；所述判断具体为：检测扩增产物在656bp位置是否存在单一扩增条带，如果存在，则说明样品中含有肠炎沙门氏菌；如果没有，则样品中不含有肠炎沙门氏菌。

步骤一中，所述引物对具体为：正向引物的碱基序列如SEQ ID N0：2所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：3所示。

步骤二中，所述PCR法中，PCR检测体系具体为：25μL反应体系具体为，10×PCR反应缓冲液2.5μL，25mmol/L的Mg²⁺2.0μL，2.5mmol/L的dNTP 1.0μL，5μM引物对1μL，Taq酶1U，样品DNA模板溶液2～5μL，最后补水至25μL。

步骤二中，所述PCR法中，PCR检测体系扩增参数具体为：94℃预变性5min，之后开始扩增循环，每个循环的程序为：94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s；循环共35个；循环结束后，72℃延伸10min，降温至12℃，结束。

第二方面，本发明还涉及一种核酸，该核酸的碱基序列如SEQ ID NO：1所示。

第三方面，本发明还涉及一种引物对，该引物对具体为：正向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：3所示。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：采用本发明的检测方法检测肠炎沙门氏菌，检测时间短，无需使用抗血清，降低了检测成本；本发明的检测方法可以用于检测某些抗血清不能检测出的菌株，如抗原不表达的菌株，弥补免疫检测的缺陷，更加具有实用性；本发明的检测靶点是自行通过比较基因组学、生物信息学筛选并经过生物学验证而得到的，具有单一特异性，检测结果可靠，结果判定简单。

附图说明

图1为实施例1中PCR检测方法特异性评价实验凝胶电泳结果图；

图2为实施列1中PCR检测方法灵敏度评价实验凝胶电泳结果图。

具体实施方式