[发明专利]用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗的方法及其制品

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，更具体是涉及一种用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗的方法。

背景技术

我国目前生产猪瘟兔化弱毒疫苗所用的细胞为牛睾丸原代细胞。由于我国牛群BVD/MDV病比较普遍，用牛睾丸原代细胞制苗，易造成细胞外源病毒污染，且产毒滴度不高，批间差异大，给疫苗产量、效力的提高带来困难。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处，提供一种用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗的方法。该方法具有生产工艺简单且稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量。利用本发明生产的猪瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

为达到上述目的，本发明提供了一种用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗的方法，包括如下技术步骤：

(1)选择猪肾细胞系(IBRS-2)作为制苗用细胞：

(2)制苗用细胞的传代与培养：猪肾细胞系(IBRS-2)经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于继续传代或接种病毒；

(3)细胞毒种的繁殖：用细胞维持液，将新鲜脾毒制成病毒悬液，接种由步骤(2)制得的猪肾细胞系(IBRS-2)良好细胞单层，继续培养；每隔4～5日收获换液一次，取二收、三收细胞培养毒液作为生产用毒种；

(4)制苗毒液的繁殖：取步骤(2)中已形成猪肾细胞系(IBRS-2)良好单层的培养瓶，弃去所述细胞生长液，接种含毒的细胞维持液，继续培养；接毒后第5日作第一次收获换液，以后每隔4日收获换液1次，收获的毒液置-15℃以下保存；

(5)配苗、分装及冻干：将检验合格的所述毒液，混合于同一容器内，加入稳定剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；每头份含细胞毒液不少于0.015ml，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。

本发明是用猪肾细胞系(IBRS-2)培养猪瘟兔化弱毒，收获细胞病毒液，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成细胞系猪瘟活疫苗。

上述技术方案中，步骤(2)、(3)、(4)中所述的细胞培养温度是36～37℃。

上述技术方案中，步骤(2)中所用生长液的配方是：90％～92％MEM液、8％～10％犊牛血清、加适量的抗菌素，pH值调整为7.0～7.2。

上述技术方案中，步骤(3)及(4)中所用维持液的配方是：95％～98％MEM液、2％～5％犊牛血清、加适量的抗菌素，pH值调整为7.2～7.4。

上述技术方案中，步骤(3)及(4)中所述的接种量为含3％～5％生产用细胞毒种或0.2％～0.5％脾毒种的维持液。

其中，步骤(3)中对细胞毒种进行鉴定：细胞毒种鉴定完全符合猪瘟兔化弱毒株毒种标准，对猪安全无副作用，细胞毒种每1ml含病毒≥500,000个家兔感染量。

步骤(4)中对制苗毒液进行检验：按现行《中华人民共和国兽药典》进行检验，应无细菌、霉菌、支原体生长。细胞毒液对猪安全无副作用，各收次病毒培养液分别用家兔测定，每1ml含病毒≥500,000个家兔感染量。

步骤(5)中对成品进行检验：按现行《中华人民共和国兽药典》进行检验，应符合“猪瘟活疫苗(细胞源)”规定，对猪安全无副作用。每头份疫苗对家兔的最小感染量为≤1/7500。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)用猪肾细胞系(IBRS-2)替代牛睾丸原代细胞制造猪瘟活疫苗，可解决牛源外源病原污染的问题，通过原材料和培养条件的严格控制，保证生产出来的疫苗纯粹，确保疫苗的安全性。

(2)采用本发明培养的猪瘟细胞毒液病毒含量高，用高滴度的抗原制造的猪瘟活疫苗可以大大提高疫苗的免疫效力，经免疫攻毒试验结果显示，对猪瘟强毒攻击可100％保护。

(3)用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗各批间质量差异小，具有生产工艺简单稳定、易操作、产量大、成本低等特点，具备工业化大生产的可行性和可放大性，具有很好的经济效益和应用前景。

附图说明

图1为本发明的制备流程图。

具体实施例

以下结合说明书附图及具体实施例来对本发明作进一步的描述。实施例1用猪肾细胞系(IBRS-2)生产猪瘟活疫苗的方法

(1)制苗用细胞的选择：选用猪肾(IBRS-2)细胞系；