[发明专利]一种联合诊断胃病或评价胃癌风险的酶联免疫吸附试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断疾病的试剂盒，尤其涉及一种通过测定受试者胃蛋白酶原I及胃蛋白酶原II的浓度并与设定的cut-off值比较来诊断胃病或早期胃癌的酶联免疫吸附试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法，属于胃病或早期胃癌的诊断或检测领域。

背景技术

胃蛋白酶原(PG)是一种门冬氨酸蛋白酶前体，是分子质量为42kDa的单链多肽，包括3个二巯键，等电点为3.7。人类PG依其电泳迁移率可以分为7个组分，较快移向阳性的1-5组分的免疫原性近似，称为胃蛋白酶原I(PGI)，主要由胃腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6-7被称为胃蛋白酶原II(PGII)，除由胃体和胃底黏膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGII。胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的基因位点、免疫反应性及生化特性上均存在一定差异。不同种的PG的产生似乎与以下几种因素相关：结构基因的数量、个体等位基因的差异以及翻译后的修饰。胃蛋白酶原无活性，在胃内盐酸作用下，或在酸性条件下，通过自身催化，从N端水解42个氨基酸残基后而转变为有活性的胃蛋白酶。胃蛋白酶为内切酶，可分解大部分蛋白质为标和胨，产生的多肽或氨基酸较少。在PG转变成胃蛋白酶的过程中，分子量由42kDa降为35kDa，等电点由3.7降为-1，主细胞中的PG贮存在细胞顶部的分泌颗粒中，当细胞受到刺激时，通过胞吐作用大部分释入腺腔，只有1％进入血液循环。在正常人血清中的PGI浓度是PGII的6倍。由于胃几乎是PG的唯一来源，并且在分泌阶段的分泌量会发生变化，因此，血清PGI和PGII不仅反映了胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。胃酸分泌过多的浅表性胃炎和H pylori感染的胃炎，PGI和PGII的分泌会增加；而在慢性严重萎缩性胃炎，当主细胞减少时PGI含量下降；当萎缩性胃炎伴有肠化、胃窦腺假幽门腺化生，PGII含量会随之增高。当肠上皮化生(intestinal metaplasia，IM)、不典型增生时，PGI分泌会减少，PGI/PGII也会发生变化，因此，血清PG可作为监测胃粘膜变化的一个可靠的标志物。高浓度的PGI还作为十二指肠溃疡及其并发症的危险性的一个亚临床指征，也可以作为观察H pylori感染根除治疗疗效的一个指标。

胃粘膜萎缩和肠上皮化生(特别是不完全型结肠化生)及异型增生是胃癌的癌前病变，对CAG患者尤其是伴有肠化和异型增生者进行病情监测，对于早期胃癌的发现意义重大。日本和中国胃癌患者的总数几乎占到全球胃癌患者总数的一半。胃癌的筛查工作始于60年代胃癌高发的日本，当时采用胃肠双重对比造影—胃镜—病理检查阶梯式的筛查方法，人力物力花费较大。自1991年开始，日本先后以血清PGI＜50ng/ml并PGI/GPII比值＜3.0和PGI＜70ng/ml并PGI/PGII比值＜3.0作为胃癌筛查的初筛指标，历经5年共检测血清样本25415例，检出胃癌43例(0.17％)，其中早癌32例(74％)。另以血清GPI＜70ng/ml并GPI/GPII比值＜3.0为胃癌筛检的Cut-off值，其灵敏度84.6％，特异度73.5％，阳性预测值0.81％，阴性预测值99.9％。继后十年中已有13万余人接受了血清PG法胃癌筛查，检出胃癌患者123人，检出率0.13％。

中国专家组于1997-1999年在中国胃癌高发区采用两轮筛选法进行胃癌筛查，以胃镜病理组织学诊断为标准比较评价了两种初筛方法：钡剂-X线双对比照影和血清胃蛋白酶原I/II含量检测。结果显示，在接受血清胃蛋白酶原I/II(PGI/PGII)检测的1750人中，分别以PGI≤50+PGI/PGII≤3和PGI≤70+PGI/GPII比值≤3为初筛Cut-off值，后者筛出应胃镜精查者近400人，符合胃癌诊断者17例，检测敏感度约为53％。特异度达到78％，第二轮胃镜精查在这组人群中检出胃癌32例。据此，血清胃蛋白酶原I/II(PGI/PGII)含量检测优于双对比照影，血清PGI含量和PGI/GPII值相结合更适合于作为中国人胃癌初筛和胃部重大疾病普查标准。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种敏感度高、特异性强和准确性好的诊断胃病或早期胃癌的酶联免疫吸附试剂盒；

本发明的另一个目的是提供一种制备上述酶联免疫吸附试剂盒的方法；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：