[发明专利]一种磷酸铝佐剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种磷酸铝佐剂及其制备方法。

背景技术

近年来，随着免疫学研究的不断深入及基因工程技术的迅速发展，活载体疫苗、DNA疫苗和蛋白质疫苗等新型疫苗的研究取得了可喜的进步。这些新型疫苗纯度高、特异性强，但免疫原性弱，诱导机体产生的免疫应答不够强，因此，应用佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答就显得尤为重要。

随着分子生物学的快速发展，多肽疫苗及亚单位疫苗不断涌现，无论在数量上还是质量上对疫苗佐剂的要求都愈来愈高。人们在寻找新型佐剂的同时，对常规佐剂的改良研究也更加重视起来。虽已涌现不少新型佐剂，但大多尚处于实验研究阶段。所以目前在疫苗产业中铝佐剂是最传统最重要也是应用最多的疫苗佐剂。

铝佐剂的作用机理主要是在组织中形成抗原贮藏库，产生颗粒性抗原来促进抗原提呈给免疫细胞，使抗原滞留，缓慢释放，从而吸引活性淋巴细胞，激活补体系统。

铝盐佐剂成本低、使用方便，是生物制品生产中应用最广的一种佐剂，也是最早被美国食品药物监督管理局(FDA)批准用于人类疫苗的佐剂。自1926年Glenny首先应用铝盐黏附白喉类毒素至今已广泛应用于人兽疫苗。铝佐剂通常在人用疫苗中含量为0.5mg/剂量，WHO推荐最高不超过1.25mg/剂量。

铝佐剂包括氢氧化铝佐剂和磷酸铝佐剂。天然的氢氧化铝有上百种存在形式，例如Al(OH)₃、Al₂O₃·H₂O、AlOOH等.而商品化的氢氧化铝佐剂，实际上是Al(OH)₃的不完全脱水产物，即纤维状结晶形态的偏氢氧化铝AlO(OH)，氢氧化铝佐剂(分子式为AlO(OH))的等电点为11.4，在生理条件(人体内)时带正电荷，可较好地吸附带负电荷的蛋白疫苗，如流感疫苗，乙肝疫苗等。而磷酸铝佐剂的等电点依赖于磷酸根和羟基的比例，完全没有磷酸根时(分子式Al(OH)₃)等电点为9.6，完全没有羟基时(分子式AlPO₄)等电点为4.0，商业化的磷酸铝佐剂的等电点一般为5.0，在生理条件时带负电荷，可较好地吸附带正电荷的蛋白疫苗，如HPV疫苗等。

中国专利CN2006800090340、CN2006800475728、CN2006800476098公开了磷酸铝佐剂具有下列技术特征：粒径0.5-20um；P/Al 0.3-1.2(优选0.8-1.2)；等电点(PZC)4.0-7.0(优选5.0-6.5，最优5.7)；以沉淀法生产。

中国专利CN028149335公开了磷酸铝佐剂具有下列技术特征：其为Al(OH)_x(PO4)_y，其中各阴离子化合价和乘以其摩尔分数是-3，P/Al 0.3-0.99；以沉淀法生产。

但现有的磷酸铝佐剂在均一性和包载能力方面缺陷，影响了此佐剂诱导产生的体液应答水平。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种稳定性高、均一性好和包载能力强的磷酸铝佐剂及其制备方法，以应用此佐剂可诱导产生较强的体液应答水平，同时有利于在疫苗的生产过程中，可减少佐剂和疫苗的添加量，降低疫苗的毒副作用。

为此，本发明公开了一种磷酸铝佐剂，其特征在于粒径200-4500nm；多分散性系数0.01-1.0；等电点4.0-6.0。

在一实施例中，所述磷酸铝佐剂，其特征在于粒径200-800nm；多分散性系数(PDI)0.10-0.50；等电点(PZC)4.2-5.8；其中最优选粒径200～300nm；多分散性系数(PDI)0.15～0.35；等电点(PZC)4.5～5.5。

在一实施例中，所述磷酸铝佐剂中铝离子浓度为5620ug/ml，磷离子的浓度为5174ug/ml，P/Al比为0.92。

另一方面，本发明还公开了所述磷酸铝佐剂的制备工艺，包括下列步骤：

a)采用蠕动泵将0.06mol/L氯化铝与0.06mol/L磷酸二氢钠的混合溶液和0.5mol/L强碱溶液分别以相应的流速泵入反应器中，搅拌，其中氯化铝与磷酸二氢钠溶液和强碱溶液的流速比为5∶2～15∶2；

b)收集混悬液，静置，弃去上清夜，离心，得沉淀；

c)洗涤沉淀、溶解即得磷酸铝佐剂溶液。