[发明专利]用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞

权利要求书

1.一种用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述细胞为高表达铁蛋白细胞。

2.如权利要求1所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述高表达铁蛋白细胞为铁蛋白基因质粒转染细胞。

3.如权利要求2所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述铁蛋白基因质粒为铁蛋白重链全基因质粒。

4.如权利要求3所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述铁蛋白重链全基因质粒的构建方法为：将mRNA进行逆转录、聚合酶链反应，扩增出铁蛋白重链全基因片断，将铁蛋白重链全基因插入到载体中，构建铁蛋白重链全基因质粒。

5.如权利要求4所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述铁蛋白重链全基因质粒的构建方法为：将mRNA逆转成cDNA，根据铁蛋白重链基因序列，应用含有限制性内切酶位点的聚合酶链式反应引物，扩增出铁蛋白重链全基因片段，应用限制性内切酶对铁蛋白重链全基因片段和载体进行消化，对消化产物进行纯化后将铁蛋白全基因插入载体形成铁蛋白重链全基因质粒。

6.如权利要求5所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述载体为pcDNA3.1，所述铁蛋白重链全基因质粒的构建方法为：将mRNA逆转成cDNA，根据铁蛋白重链基因序列，应用含有NotI和BamHI限制性内切酶位点的聚合酶链式反应引物，扩增出铁蛋白重链全基因片段，应用NotI和BamHI限制性内切酶对铁蛋白重链全基因片段和载体pcDNA3.1进行消化，对消化产物进行纯化后经T4连接酶将铁蛋白全基因插入载体pcDNA3.1形成铁蛋白重链全基因质粒。

7.如权利要求6所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述聚合酶链式反应引物序列如下：

上游引物序列：5′-ataagaatgcggccgctaaactataccatgaccaccgcgtctccctc-3′；

下游引物序列：5′-cgcggatccgcgttagctctcatcaccgtgtcccag-3′。

8.如权利要求2所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述细胞为胶质瘤C6细胞，得到铁蛋白基因质粒转染细胞的方法为：

(1)将胶质瘤C6细胞接种于培养基中，在细胞培养孔中培养，使胶质瘤C6细胞达到80％～90％融合度；

(2)转染：铁蛋白基因质粒与转染剂混合、室温孵育后，加入所述细胞培养孔，轻轻混匀培养过夜；

(3)转染24hr后消化细胞进行1∶10传代，最后筛选。

9.如权利要求8所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述转染剂为Invitrogen公司生产的Lipofectamine 2000。

10.如权利要求1-9中任一项所述的用于磁共振活体示踪的超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞，其特征在于所述超顺磁性纳米铁颗粒标记的细胞由超顺磁性纳米铁颗粒与高表达铁蛋白细胞共同培养得到，超顺磁性纳米铁颗粒的标记浓度为30～60μg/mL。