[发明专利]一种天然海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及细菌抑制剂领域，具体地说是一种天然海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用。

背景技术

致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品等引起疾病暴发流行，病情严重者，可危急生命，常作为饮水和食物(或药物)的卫生学标准，而由于微生物的变异比较快，不断产生抗药性等，开发新型细菌抑制剂依然十分迫切，其中，微生物源细菌抑制剂具有易大规模培养、成本较低、高效和易降解等优点，其研究与开发尤其引人注目，显示出良好的生态效益、经济效益和社会效益，展现出广阔的发展前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种天然海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种天然海藻内生真菌二萜生物碱类化合物：所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物如(I)所示。

制备方法如下步骤制备：

1)将米曲霉(Aspergillus oryzae)cf-2接种于真菌液体培养基中静止发酵20-25天，过滤，发酵液经乙酸乙酯萃取浓缩，收集的菌丝体用有机溶剂提取，而后再经乙酸乙酯萃取浓缩，发酵液所得浓缩物和菌丝体所得浓缩物合并，即为粗提物；

所述米曲霉(Asp.oryzae)cf-2，其于2010年3月1日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC M 2010045，株号为cf-2；

2)取步骤1)中的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；

3)收集步骤2)中以洗脱液体积比0-10∶100梯度的洗脱组分，将收集的洗脱组分进行凝胶柱层析、硅胶柱层析和薄层层析分离纯化，纯化收集Rf值为0.5-0.6组分，即得海藻内生真菌二萜生物碱类化合物。

步骤1)中的有机溶剂提取液为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇或甲醇中一种或几种。步骤2)中的有机溶剂为石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮。步骤3)所述凝胶柱层析洗脱液为体积比1-2∶1的氯仿-甲醇或氯仿-乙醇；硅胶柱层析洗脱液为乙酸乙酯或丙酮；薄层层析展开剂为乙酸乙酯。步骤3)所述凝胶柱层析时收集经TLC检测含红色斑点的组分。

应用：所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物具有抑菌作用。所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物具有抑制革兰氏阴性细菌活性的作用。所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物具有抑制大肠杆菌活性的作用。

本发明具有以下优点：

本发明通过分离于海洋红藻异管藻的真菌米曲霉(Asp.oryzae)cf-2发酵经提取、分离获得的二萜生物碱类天然化合物，经杀虫活性实验得出二萜生物碱类化合物具有显著的抑菌活性。

具体实施方式：

下面结合实施实例对本发明做进一步阐述。

实施例1

海藻内生真菌二萜生物碱类化合物如(I)所示。

实施例2

二萜生物碱类化合物的制备方法：

取平板上生长良好的真菌米曲霉(Asp.oryzae)cf-2菌种，其于2010年3月1日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC M2010045，株号为cf-2；切成小块接种于PDB液体培养基中，每1L三角瓶中放300mL培养基，共30瓶，室温静止发酵23天，加入发酵液二分之一体积的乙酸乙酯杀灭真菌，过滤，分别收集菌丝体和发酵液。