[发明专利]应用肿瘤特异性启动子表达报告基因来检测循环血中肿瘤细胞的方法和试剂

权利要求书

1.一种肿瘤特异性启动子，其在肿瘤细胞中的活性比其在正常细胞中的活性要高。

2.权利要求1的肿瘤特异性启动子，其包括人端粒酶逆转录酶启动子，survivin启动子，medkine启动子，癌胚抗原启动子，MUC-1启动子和probasin基因启动子。

3.权利要求1的肿瘤特异性启动子，其可以是组织或者细胞型特异性基因的原启动子，也可以是经改造的组合启动子，例如含有源自组织或细胞型特异性启动子的序列和源自其他启动子的增强子的嵌合型启动子。

4.权利要求3的肿瘤特异性启动子，其中所述肿瘤特异性启动子是改造的人端粒酶逆转录酶启动子，其含有人端粒酶逆转录酶启动子序列以及源自CMV启动子的增强子序列。

5.权利要求4的肿瘤特异性启动子，所述启动子序列如SEQ ID NO：8所示。

6.一种载体，其是包括由权利要求1-5任一项的肿瘤特异性启动子驱使表达的报告基因的基因表达载体。

7.权利要求6的载体，其中提及的报告基因是一种通常作为启动子活性指示剂的基因。

8.权利要求7的载体，其中所述报告基因包括荧光蛋白(绿色，红色，黄色和蓝色荧光蛋白)的基因，萤火虫荧光素酶基因，海肾荧光素酶基因，细菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因。

9.权利要求7的载体，其中所述基因表达载体指任何一种用于基因转染的载体。

10.权利要求7的载体，其中所述基因表达载体包括质粒，质粒/脂质复合物以及病毒载体。

11.权利要求10的载体，其中提及的病毒载体是指复制缺陷型病毒载体和可复制型病毒载体，例如腺病毒载体，可复制型腺病毒载体，疱疹病毒载体，牛痘病毒载体等。

12.权利要求11的载体，其中所述病毒载体是经过病毒纤维改进后的。

13.权利要求12的载体，其中所述病毒纤维改进是通过将编码精氨酸-甘油酸-天冬氨酸(RGD)编码序列插入到位于图距单位86-91的腺病毒基因组中，从而使病毒纤维蛋白含RGD序列，改变其受体特异性，改进后的载体可经整合素蛋白(integrin)进入靶细胞。

14.权利要求7的载体，其中组织或肿瘤特异性启动子的活性通过二元表达系统来加强。

15.权利要求7的载体，其中提及的基因表达载体包括可复制型腺病毒载体Ad/E1-GFP和Ad/E1-GFP-RGD，复制缺陷型腺病毒载体Ad/TERT-GFP，Ad/TERT-LacZ，Ad/GFP-TRAIL和Ad/TERT-Luciferase.。

16.一种试剂盒，其包含权利要求1-5任一项的肿瘤特异性启动子和/或权利要求6-15任一项的载体，用于癌症患者的早期诊断，治疗反应的预测及其预后。

17.权利要求16的试剂盒，其用于检测血标本和骨髓标本中的肿瘤细胞。

18.一种诊断剂，其包含权利要求1-5任一项的肿瘤特异性启动子和/或权利要求6-15任一项的载体，用于癌症患者的早期诊断，治疗反应的预测及其预后。

19.权利要求18的诊断剂，其用于检测血标本和骨髓标本中的肿瘤细胞。

20.权利要求1-6中任一项的肿瘤特异性启动子用于制备权利要求7-15任一项的载体以及权利要求16-17任一项的试剂盒和权利要求18-19任一项的诊断剂的应用。