[发明专利]一种促性腺激素的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促性腺激素的纯化方法，特别是涉及一种从绝经妇女 的尿液中提取的促性腺激素的纯化方法。

背景技术

促性腺激素(gonadotropin，gonadotropic hormone)是指能够促进雌 雄两种性腺的发育，增加性激素分泌的一类激素，如脑垂体前叶分泌的黄 体生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)，人胎盘绒毛膜分泌的绒毛膜促 性腺激素(HCG)。其中，FSH和LH的主要作用是促进卵巢或睾丸生成 和分泌甾体性激素，它们与HCG合用，可治疗性腺激素分泌不足所致的 原发性或继发性闭经，无排卵性稀发月经所致的不孕症等。绝经期妇女由 于雌性激素和孕激素缺乏，从而反馈调节垂体，分泌大量FSH和LH，由 尿中排出。因此，目前以FSH和LH为主要成分的促性腺激素生产方法多 以绝经期妇女的尿液作为原料，经过高岭土吸附、酒精抽提得到＞3iu/mg 的尿促性腺激素粗品。国内目前常用的纯化方法收率偏低(一般小于 50％)，成品效价在100iu/mg左右。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从绝经妇女的尿液中提取的促性腺激素 的纯化方法。与已有的促性腺激素的提取分离方法相比，本发明的纯化方 法获得的以FSH和LH为主要成分的促性腺激素产品具有更高的效价(效 价＞150iu/mg)，收率也更高(＞75％)。

本发明提出的从绝经妇女的尿液中提取的促性腺激素的纯化方法，包 括以下步骤：

(1)将尿促性腺激素粗品以溶液A溶解后加入硅酸铝粉末进行吸附， 离心得沉淀以溶液A洗涤；再以溶液B洗脱沉淀，洗脱液过滤后加入乙醇 进行沉淀，干燥沉淀得中间体I；

(2)将中间体I以溶液C溶解，将得到的溶液经阴离子交换树脂进 行层析，以溶液D洗脱，洗脱液中加入乙醇进行沉淀，干燥沉淀得中间体 II；

(3)将中间体II以溶液B溶解，先后加入溶液E和溶液F除热原， 再加入乙醇进行沉淀，干燥沉淀，分装得成品。

其中，所述溶液A可以为0.05-0.08mol/L醋酸钠缓冲液，以冰醋酸调 节pH至4.5-5.5；溶液B可以为含有8-12重量％乙酸铵的20-60体积％乙 醇水溶液；溶液C可以为0.05-0.07mol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 (Tris-HCl)缓冲液，以盐酸调节pH至6-8；溶液D可以为0.2-0.3mol/L 的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液，以盐酸调节pH至6-8； 溶液E可以为0.1-0.3mol/L磷酸钠溶液；溶液F可以为0.2-0.4mol/L的醋 酸钙溶液。

例如，在本发明的一种优选的实施方式中，所述溶液A为0.05mol/L 醋酸钠缓冲液，以冰醋酸调节pH至5.0；溶液B为含有10％乙酸铵的40％ 乙醇溶液；溶液C为0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液，以2mol/L盐酸调节 pH至7.0；溶液D为0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液，以2mol/L盐酸调节pH 至7.0；溶液E为0.2mol/L磷酸钠溶液；溶液F为0.3mol/L的醋酸钙溶液。

下面，对步骤(1)中的操作进行详细的说明：所述洗脱液的过滤方 式可以为各种常规的过滤方式，优选采用抽滤，进一步优选先抽滤后再用 1万分子量的膜超滤；所述沉淀用乙醇可以为浓度为75-100体积％的乙醇， 优选使用95体积％的药用级乙醇；优选情况下，为了节约干燥时间，可以 在沉淀干燥前用先无水乙醇进行脱水；干燥操作优选采用真空干燥，进一 步优选采用在五氧化二磷存在条件下的真空干燥。

下面对步骤(2)中的操作进行详细的说明：所述阴离子交换树脂优 选为DE-23阴离子交换树脂和/或DEAE阴离子交换树脂；优选情况下， 在层析时先用溶液C洗涤完毕后再用溶液D进行洗脱；所述沉淀用乙醇可 以为浓度为75-100体积％的乙醇，优选使用95体积％的药用级乙醇；优 选情况下，为了节约干燥时间，可以在沉淀干燥前用先无水乙醇进行脱水； 干燥操作优选采用真空干燥，进一步优选在五氧化二磷存在条件下的真空 干燥。