[发明专利]一种检测蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测蛋白的方法。

背景技术

人血清蛋白质种类繁多，成份复杂，在人体健康和疾病过程中起着非常重要的作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳是目前为止普遍使用的分析分离血液蛋白的方法，在血清蛋白质组学研究中是一个非常重要的分离手段。用于凝胶蛋白区带的检测识别方法有很多种，包括有机染料染色法(如考马斯亮兰、氨基黑、刚果红等)、银染色法、荧光染色法和化学法光成像法等。而这些方法都有其一定局限性，包括有机染料的费时和低灵敏性、银染的复杂及冗长的步骤、荧光染料的发射光谱窄等。因而，需要发展一种简单、快速、高灵敏的多种蛋白质同时检测的凝胶成像新方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测蛋白的方法。

本发明所提供的检测蛋白的方法，包括如下步骤：

1)将待测蛋白进行凝胶电泳，使待测蛋白得到分离，并以条带形式或点的形式分布在凝胶上，将得到的凝胶记作带有蛋白条带或蛋白点的凝胶；

2)将所述带有蛋白条带或蛋白点的凝胶置于量子点溶液中，浸泡，所述量子点与所述带有蛋白条带或蛋白点的凝胶中的蛋白条带或蛋白点结合，得到蛋白条带-量子点结合体或蛋白点-量子点结合体，将得到的凝胶记作带有蛋白-量子点结合体的凝胶；

3)将所述带有蛋白-量子点结合体的凝胶进行凝胶成像实现所述待测蛋白的检测。

所述量子点溶液为如下1)、2)或3)所示：

1)所述量子点溶液是按照包括如下步骤的方法配制得到的：将所述量子点溶于水中，再调节pH值至3.6-4.4，具体为3.6、3.7或4.4，得到所述量子点溶液；所述量子点在所述量子点溶液中的浓度为0.1mM-0.3mM，具体为0.1mM、0.2mM或0.3mM；

2)所述量子点溶液由所述量子点、可溶性碱和水组成，所述量子点在所述量子点溶液中的浓度为0.2mM-0.325mM，具体为0.2mM、0.27mM或0.325mM，所述可溶性碱在所述量子点溶液中的浓度为1.8-3.0mol/L，具体为1.8mol/L、2.1mol/L或3.0mol/L；

3)所述量子点溶液由所述量子点、可溶性碱、N，N，N’，N’-四甲基乙二胺和水组成，所述量子点在所述量子点溶液中的浓度为0.2mM-0.325mM，具体为0.2mM、0.27mM或0.325mM，所述可溶性碱在所述量子点溶液中的浓度为1.8-3.0mol/L，具体为1.8mol/L、2.1mol/L或3.0mol/L，所述N，N，N’，N’-四甲基乙二胺在所述量子点溶液中的浓度为9.9mM-26.5mM，具体为9.9mM、17.9mM或26.5mM。

上述过程中，所述1)所示的量子点溶液中，是用巯基乙酸或巯基乙酸的水溶液调节pH值的，所述巯基乙酸在所述量子点溶液中的浓度为0.4％-0.6％(体积百分含量)，具体为0.4％、0.5％或0.6％；

所述2)所示的量子点溶液中，所述可溶性碱为氢氧化钠或氢氧化钾；

所述3)所示的量子点溶液中，所述可溶性碱为氢氧化钠或氢氧化钾。

上述过程中，所述浸泡的时间为1h-4h，具体为1h、2h或4h。

上述过程中，所述量子点溶液为所述1)所示，所述浸泡的时间为2h或4h；所述量子点溶液为所述2)所示，所述浸泡的时间为1h；所述量子点溶液为所述3)所示，所述浸泡的时间为1h。

上述过程中，所述量子点的结构如下：所述量子点由核心层和壳层组成，核心层为碲化镉，壳层为巯基乙酸，壳层通过静电作用覆盖于核心层的周围；静电作用是指巯基乙酸中带孤对电子的S与CdTe中带正电荷的Cd之间形成的静电作用；和/或，所述量子点的粒径为3-5nm；和/或，所述量子点的发射波长为520nm；和/或，所述量子点的激发波长为250nm-380nm。

上述过程中，所述量子点是按照包括如下步骤的方法得到的：

1)将0.1276g碲粉溶于10mL水中，磁搅拌，充氮气15-20min，得到溶液I；

2)向溶液I中加入0.08gNaBH₄，在充氮气的条件下反应4h，得到溶液II，溶液II分上层清液和下层沉淀；

3)将0.45672gCdCl₂·2.5H₂O和420μL巯基乙酸加入200mL水中，搅拌，用NaOH调节pH值至9.2，在充氮气的条件下反应30min，得到溶液III；

4)将所述溶液II中上层清液加入所述溶液III中，在充氮气的条件下反应30min，得到溶液IV；