[发明专利]一种血管瘤病变型J亚群禽白血病突变体病毒株及其构建方法

权利要求书

1.一种血管瘤病变型J亚群禽白血病突变体病毒株，该病毒株为J亚群禽白血病感染性克隆化病毒rSCAU-HN06，已于2009年11月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V200914。

2.权利要求1所述血管瘤病变型J亚群禽白血病突变体病毒株的构建方法，其特征在于该病毒株是采用核苷酸序列如SEQ ID NO：1～4所示特异性引物，通过重叠PCR技术对J亚群禽白血病感染性病毒rSCAU-HN06进行E元件缺失，构建而得。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)特异性引物

特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～4所示；

(2)采用重叠PCR技术将血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒SCAU-HN06株的基因CalI-NotI之间的E序列缺失，并构建为质粒，所述血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒SCAU-HN06株的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；

(3)将步骤(2)中所得质粒用CalI，NotI双酶切消化，所得片段与pSK-ALV-HN经CalI-NotI双酶切消化的载体片段连接，得到pSK-ALV-HN-ΔE质粒；

(3)将pSK-ALV-HN-ΔE质粒转染病毒宿主细胞，经过培养后，收获细胞培养上清，用该上清感染鸡胚成纤维细胞后进行盲传，从而得到所需血管瘤病变型J亚群禽白血病突变体病毒株。

4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于步骤(3)中所述病毒宿主细胞为禽类细胞。