[发明专利]一种用于结核病预防的新型重组疫苗有效
申请号: | 201010140374.5 | 申请日: | 2010-04-07 |
公开(公告)号: | CN101850112A | 公开(公告)日: | 2010-10-06 |
发明(设计)人: | 鲍朗;杨晓玲;邓仪昊 | 申请(专利权)人: | 四川大学 |
主分类号: | A61K39/04 | 分类号: | A61K39/04;A61K39/39;A61K48/00;A61P31/06;C12N15/31;C12N15/63 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 610041 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 结核病 预防 新型 重组 疫苗 | ||
1.一种重组卡介苗rBCG:GMCSF-ESAT6,其特征在于,能够稳定的表达GMCSF-ESAT6嵌合蛋白。
2.如权利要求1所述的重组卡介苗,其特征在于,免疫原性强于传统卡介苗。
3.如权利要求1所述的重组卡介苗的制备方法,其特征在于,该方法包括以下几个步骤:
(1)hGM-CSF基因的扩增、结核分枝杆菌ESAT6基因的扩增;
(2)GMCSF-ESAT6嵌合基因的扩增;
(3)将GMCSF-ESAT6嵌合基因插入至大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒pMV361中,构建rpMV361GMCSF-ESAT6;
(4)将(3)中的重组质粒电转化入卡介苗。
4.如权利要求1所述的重组卡介苗,其特征在于,通过抗生素筛选、提取基因组、PCR及诱导表达后进行Western-blot鉴定,得到rBCG:GMCSF-ESAT6。
5.一种重组质粒,其特征在于,用基因工程技术将人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)序列和结核分枝杆菌ESAT6基因序列嵌合后插入大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒序列中。
6.如权利要求5所述的重组质粒,其特征在于,大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒为pMV361。
7.如权利要求5所述的重组质粒,其特征在于,将人GM-CSF基因序列和结核分枝杆菌ESAT6基因序列连接后插入大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒的多克隆位点处。
8.如权利要求5所述的重组质粒,其特征在于,用PCR、酶切和测序鉴定,得到重组质粒rpMV361GMCSF-ESAT6。
9.如权利要求1所述的重组卡介苗,其特征在于,将如权利要求5所述的重组质粒电转化入卡介苗,得到rBCG:GMCSF-ESAT6。
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