[发明专利]表达IBDV免疫原基因的重组杆状病毒及其制备和应用无效
| 申请号： | 201010140802.4 | 申请日： | 2010-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN101792742A | 公开（公告）日： | 2010-08-04 |
| 发明（设计）人： | 许信刚;童德文;张琪 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/40;C12N15/866;A61K48/00;A61K39/12;A61P31/14 |
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| 地址： | 71210*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 ibdv 免疫原 基因 重组 杆状病毒 及其 制备 应用 | ||
1.一种表达IBDV免疫原基因的重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒带有SEQ ID NO.1所示的序列。
2.根据权利要求1所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒表面展示IBDV结构蛋白VP2。
3.一种权利要求1或2所述重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，步骤包括：
a、制备VP2基因；
b、将上述的VP2基因，插入到杆状病毒表面展示转座载体pBacSC的p10启动子下游，构建含IBDV的VP2基因的重组杆状病毒转座质粒pBacSC-VP2；
c、将上述重组杆状病毒转座质粒pBacSC-VP2转入大肠杆菌内进行同源重组，得重组杆状病毒DNA；
d、将步骤c得到的重组杆状病毒DNA转染昆虫细胞，得到重组杆状病毒。
4.根据权利要求3所述的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，所述VP2基因的制备方法为：用PCR方法扩增了IBDV陕西株VP2基因，并将其克隆到pMDl8-T载体，构建了pMDl8T-VP2质粒，酶切pMDl8T-VP2质粒，回收VP2基因。
5.根据权利要求3所述的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，步骤d所述重组杆状病毒DNA转染昆虫细胞的方法为：将重组杆状病毒DNA通过脂质体介导方法转入昆虫细胞中。
6.根据权利要求3所述的重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，步骤c所述大肠杆菌为感受态大肠杆菌DH10Bac。
7.如权利要求1或2所述的重组杆状病毒在制备鸡传染性法氏囊病病毒疫苗中的应用。
8.一种制备鸡传染性法氏囊病病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述重组病毒接种昆虫细胞，培养48～72h，收取感染细胞，-40℃/37℃冻融，离心，取上清测定病毒PFU，调整病毒的滴度使其达到109PFU/ml。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述昆虫细胞为Sf9昆虫细胞。
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