[发明专利]一种调节生物体内微小核糖核酸含量的方法及其用途

权利要求书

1.一种调节生物体内微小核糖核酸含量的方法，该方法包括以下步骤：

(1)调节供体细胞细胞微粒子中的微小核糖核酸的含量；

(2)分离供体细胞细胞微粒子；

(3)将分离的细胞微粒子引入生物体内。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供体细胞细胞微粒子的来源选自体液，优选为血液；细胞培养物；和组织中的一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述调节供体细胞细胞微粒子中的微小核糖核酸的含量步骤为增加或减少供体细胞细胞微粒子中的微小核糖核酸的表达量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述增加供体细胞细胞微粒子中的微小核糖核酸的表达量的方法为施加外源性刺激和/或导入微小核糖核酸前体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述施加外源性刺激包括以下步骤：在体外培养的细胞中加入一种或多种能够影响细胞的炎症反应、代谢情况、生活周期和功能的外源性刺激物，例如激素、细胞因子、脂多糖、自由脂肪酸、高级糖基化终产物和过氧化氢，然后孵育。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述导入微小核糖核酸前体包括以下步骤：采用脂质体载体将相应的微小核糖核酸前体导入细胞内，然后孵育。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述减少供体细胞细胞微粒子中的微小核糖核酸的表达量的方法为施加外源性刺激和/或导入微小核糖核酸的反义RNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述施加外源性刺激包括以下步骤：在体外培养的细胞中加入一种或多种能够影响细胞的炎症反应、代谢情况、生活周期和功能的外源性刺激物，例如激素、细胞因子、脂多糖、自由脂肪酸、高级糖基化终产物和过氧化氢，然后孵育。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述导入微小核糖核酸的反义RNA包括以下步骤：采用脂质体载体将相应的微小核糖核酸的反义RNA导入细胞内，然后孵育。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述分离供体细胞细胞微粒子的方法选自差速离心法、免疫吸附法和超滤法中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述差速离心法包括以下步骤：

(1)将细胞培养物或组织，或者体液以300g的转速离心5分钟，取上清；

(2)将上清以1500g的转速离心20分钟，取上清；

(3)将上清以10000g的转速离心30分钟，取上清；

(4)将上清以110000g的转速离心70分钟，沉淀即供体细胞细胞微粒子。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述免疫吸附法包括以下步骤：

(1)将细胞培养物或组织，或者体液以3000转/分的转速离心30分钟，取上清；

(2)将上清置于吸附细胞特异性抗体或免疫磁珠的组织培养皿上温育30～60分钟，回收被吸附的细胞微粒子。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述超滤法包括以下步骤：

(1)将细胞培养物或组织，或者体液以3000转/分的转速离心30分钟，取上清；

(2)将上清置于带有100KD滤膜的浓缩离心管中，在4000转/分钟的转速下离心、浓缩即得。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其特征在于，所述生物体选自人；动物，例如软骨鱼、硬骨鱼、两栖动物、爬行动物、鸟类和哺乳类；微生物，例如细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、放线菌和病毒中的一种或多种。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述病毒选自DNA病毒和RNA病毒，例如乙肝病毒、天花病毒、炭疽病毒、艾滋病病毒、SARS病毒和流感病毒中的一种或多种。

16.一种预防和/或治疗疾病的方法，该方法包括采用根据权利要求1至15中任一项所述的方法来调节人或动物体内与疾病相关的微小核糖核酸的含量。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述微小核糖核酸的含量增加或减少与疾病发生和/或发展相关。