[发明专利]利用巨大芽孢杆菌制备去甲基雷帕霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种去甲基雷帕霉素的制备方法。

背景技术

雷帕霉素(Rapamycin；西罗莫司，Sirolimus)是吸水链霉菌AY B-994和吸水链霉菌FC904发酵产生的具有免疫抑制、抗真菌、抗增殖和抗肿瘤活性的大环内酯化合物(图1)，哺乳动物雷帕霉素靶位(mammalian target of rapamycin C1，简称mTORC1)抑制剂。已作为肾移植抗排斥药物、预防和治疗支架植入后冠状动脉再狭窄的雷帕霉素涂层支架应用于临床；正作为抑制mTOR信号传导途径的抗肿瘤药物(抗白血病、乳腺癌、胃癌、肠癌、肝癌等)进行研究或临床试验；最新研究表明，雷帕霉素具有延长老龄小鼠生命周期的作用。

作为mTORC1抑制剂雷帕霉素衍生物的化学半合成研究也取得成效。雷帕霉素43位分别被乙二醇、乙氧基、四氮唑取代的半合成衍生物依维莫司(Everolimus，RAD001)、比奥莫司(BiolimusA9)、Zotarolimus均已作为药物支架的涂层应用于临床。依维莫司、替西罗莫司(Temsirolimus，CCI-779，43位被丙二酯取代)已由FDA分别于2007年8月和2009年3月批准应用于晚期肾癌的治疗，对其他癌症的治疗也已进入临床试验阶段；Deforolimus(AP23573，43位由亚磷酸取代)抗癌作用已进入临床试验阶段，如已完成肉瘤III期、乳腺癌II期的临床试验。

采用与本发明类似的技术获得去甲基雷帕霉素的报道极为有限。游动放线菌ATCC63771(Actinoplanes sp.ATCC 63771)将雷帕霉素转化为7-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(US PATENT，5849730，1998年12月15日)；链霉菌NCIMB40515(Streptomyces sp.NCIMB40515)转化雷帕霉素为42-O-去甲基雷帕霉素；龟裂链霉菌ATCC 28893(Streptomyces rimosus ATCC 28893)转化雷帕霉素为7-O-去甲基雷帕霉素、29-O-去甲基雷帕霉素和42-O-去甲基雷帕霉素(Enzyme and Microbial Technology，21：405～412，1997)；Streptomyces toyocaensis ATCC 39471转化雷帕霉素为42-O-去甲基雷帕霉素(Journal of Antibiotics，48：657～666，1995)。已报道的对雷帕霉素具有转化能力的微生物菌株还有：Gliocladium celiquescens ATCC10097，Trichothecium roseum ATCC 12519、Syncephalastrum nigricans ATCC 12266、Syncephalastrum racemosus ATCC 1332B、Absidiaglauca ATCC 7852、Aspergillus alliaceus ATCC 10060、Cunninghamella baineri ATCC 36252、Botrytis elliptica ATCC 11787、Cheatomium cochliodes ATCC 10195、Thamnidium elegansATCC 8997、Streptomyce aureofaciens ATCC 10762、Streptomyce lavandulae ATCC 55209、Nocardia asteroids ATCC 3318、Saccharopolyspora eythrea ATCC 1163、游动放线菌ATCC53771、Bacillus subtilis ATCC 55060(Enzyme and Microbial Technology，21：405～412，1997)及游动放线菌ATCC 12065(海峡药学，20：98～101，2008)。

发明内容

本发明的目的在于提供更方便、环保、有效的去甲基雷帕霉素，特别是双去甲基雷帕霉素的制备方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：将巨大芽孢杆菌接种于斜面培养基培养后，再接入种子培养基培养，然后将种子培养液接入转化培养基。待巨大芽孢杆菌在转化培养基中繁殖后，加入底物雷帕霉素，经巨大芽孢杆菌对雷帕霉素的转化，获得巨大芽孢杆菌转化雷帕霉素的转化液，转化液中包含29，42-O-双去甲基雷帕霉素、42-O-去甲基雷帕霉素及29-O-去甲基雷帕霉素及其他雷帕霉素衍生物。