[发明专利]由肝素衍生的多糖混合物、其制备方法以及含有它们的药物组合物

说明书

本申请为2003年10月8日提交的发明名称为“由肝素衍生的多糖混合物、其制备方法以及含有它们的药物组合物”的PCT申请PCT/FR2003/002960的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2005年4月6日，申请号为200380100992.5。

本发明涉及由肝素衍生得到的多糖混合物、它们的制备方法以及含有它们的药物组合物。

肝素是一种动物源的硫酸化粘多糖混合物，这种混合物主要因其抗凝血和抗血栓形成性能而得到应用。

然而，肝素本身的缺陷制约着其应用。特别是它的高抗凝血活性(抗IIa活性)可能引起出血。

人们曾提出通过肝素酯的碱解聚作用来得到低分子量肝素(EP40144)；但是，这些产物还是具有高的抗IIa活性。

在US 6 384 021中，也曾描述过极低分子量的肝素。然而，在其中的实施例中测得的抗Xa活性都没有超过120IU，并且测得的抗Xa/抗IIa比是15-50。

在WO 0208295中，采用与US 6384021不同的方法制备出极低分子量的肝素，这些肝素的活性是100-150IU，并且在一些应用实施例中测定的抗Xa/抗IIa比也是非常高的。

尽管如此，人们仍需要提高这类药物的抗Xa活性，尤其是使其活性达到150IU/mg以上，以及提高抗Xa/抗IIa比，因此，需要研制新的肝素衍生物制备方法。

因此，本发明的一个目的是通过改进现有技术中描述的方法、特别是通过控制这种解聚步骤时的水百分数，从而来提高抗Xa活性与抗Xa/抗IIa比。由此得到的肝素具有极好的抗血栓形成活性，其抗Xa活性也与肝素的抗Xa活性相近，同时还减少了出血危险性，而且抗IIa活性也非常低。同时，本发明产品的半衰期显著高于肝素的半衰期。

因此，本发明的目的是一些由肝素衍生得到的新多糖混合物，它们对活化因子X(因子Xa)和活化因子II(因子IIa)的选择性活性优于肝素。

应该理解到，可以将平均分子量1500-3000道尔顿的多糖混合物称之低聚糖。

因此，本发明的目的是这些硫酸化低聚糖混合物，它们具有组成肝素的多糖的一般结构，还具有下述特征：

-它们的平均分子量是1500-3000道尔顿，抗Xa活性是120-200IU/mg，抗IIa活性小于10IU/mg，抗Xa活性/抗IIa活性的比大于30，

-组成这些混合物的低聚糖含有2-26个糖单元，在一个末端有4，5-不饱和糖醛酸2-O-硫酸酯单元，并且含有下式的六糖ΔIIa-IIs-Is：

在本发明描述的低聚糖混合物中含有的六糖ΔIIa-IIs-Is是一种对ATIII具有高亲合性的序列，其特征在于抗Xa活性高于740U/mg。

本发明中描述的低聚糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。

对于碱金属或碱土金属盐，优选钠、钾、钙和镁盐。

可以采用高压液相色谱法，使用串联双柱，例如以商品名TSK G3000 XL和FSK G2000 XL销售的高压液相色谱仪，测定平均分子量。采用折光计进行检测。使用的洗脱剂是硝酸锂，流速是0.6ml/min。采用琼脂糖-聚丙烯酰胺凝胶层析法(IBF)分馏依诺肝素(AVENTIS)制得的标准品校正这种系统。根据Barrowcliffe等人，《Thromb.Res.》，12，27-36(1977-78)或D.A.Lane等人，《Thromb.Res.》，12，257-271(1977-78)描述的方法进行制备。采用GPC6软件(Perkin Elmer)计算这些结果。

根据Teien等人，《Thromb.Res.》，10，399-410(1977)描述的发色底物酰胺解方法，使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准测定了抗Xa活性。

采用Anderson L.O.等人，《Thromb.Res.》，15，531-541(1979)描述的技术，使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准测定了抗IIa活性。

优选六糖馏分占低聚糖混合物的15-25％。

优选在低聚糖混合物的六糖馏分中，本发明的混合物含有8-15％六糖ΔIIa-IIs-Is。