[发明专利]OPRM1基因SNP检测特异性引物、液相芯片和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及OPRM1基因SNP检测 特异性引物、液相芯片和检测方法。

技术背景

μ阿片受体(mu opioid receptor，MOR)为阿片药物发挥镇痛功效的主要作用位点，阿片类 药物通过提高痛阈，从而达到镇痛效果，当前应用于癌痛治疗的阿片类药物有多种，常见的 有吗啡、海洛因、芬太尼、杜冷丁、可代因和羟考酮等。编码μ阿片受体的基因(OPRM1)是 影响阿片类药物药效反应的主要候选基因。阿片类药物治疗癌痛非常有效，大多数晚期癌症 患者的疼痛治疗最终要过渡到第三阶梯，即强阿片类药物治疗，但临床工作中发现不同患者 有效镇痛剂量差异很大。有研究表明，疼痛敏感性和阿片类药物镇痛效应、成瘾等的个体间 差异与OPRM1多态性密切相关。

目前，OPRM1基因已经鉴定出了40多种单核苷酸多态性，其中有8个氨基酸序列发生改变。 OPRM1的多态性与甲基苯丙胺依赖/精神病和酒精中毒相关。Klepstad等观察A118G突变对癌痛 病人吗啡需求量的影响，结果表明，A118G突变导致MOR细胞外N末端第40位氨基酸由天冬氨酸 取代天冬酰胺，使MOR丢失了一个糖基化位点，携带118G突变纯合子基因型的病人对吗啡的需 求量大于118A纯合子和杂合子基因型的病人，这种差异不能用其它的因素如吗啡治疗的时间、 病情、病程等来解释。OPRM1多态性不仅在阿片类而且在非阿片类和酒精类药物中也起作用， 可能赋予患者甲基苯丙胺上瘾和酒精中毒易感性。同时，OPRM1多态性可能是甲基苯丙胺依赖 的精神病预测的因素，其中，IVS2+G691C突变与甲基苯丙胺依赖、精神病/短暂性精神病潜伏 期变短之间显著相关，而携带IVS2+G31A突变的海洛因成瘾者，其海洛因吸入剂量比没有携带 此SNP突变的吸毒者显著增多，携带A118G和IVS2+G31A的吸毒者比其他吸毒者的药物摄入量要 多。A118G和IVS2+G31A多态性作为遗传标志物将直接影响阿片类药物的摄入行为。此外， IVS3+A6151G与酒精中毒也显著相关。

目前国内外几乎没有检测OPRM1基因多态性的产品上市，大部分报道仍处于实验研究阶 段，尚未商品化，已有的检测技术主要建立在PCR技术的基础上，如直接测序法，实时荧光定 量PCR法等，这些技术存在样品易污染、假阳性率高的缺点，同时，由于检测通量的局限性不 能满足临床的需要。此外，基于TaqMan技术的等位基因差异分析法和变性高效液相色谱法也 能用于OPRM1多态性的检测，但其一次只能进行一种突变的检测，耗时费力。

发明内容

本发明的目的之一是提供OPRM1基因SNP检测液相芯片。该液相芯片可用于检测OPRM1基因 的正常基因型以及四种常见等位基因型A118G、IVS2+G31A、IVS2+G691C和IVS3+A6151G的变异。

实现上述目的的技术方案如下：

一种OPRM1基因SNP检测液相芯片，主要包括有：

(A).针对OPRM1基因的SNP位点分别设计的ASPE引物对：每种ASPE引物由5’端的tag序列 和3’端针对目的基因SNP位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列分别为：针对 A118G位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10、针对IVS2+G31A位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12、针对IVS2+G691C位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14、和/或针对IVS3+A6151 G位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16，所述tag序列选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8中的 序列；

(B).分别包被有特异的anti-tag序列的微球，上述每种微球具有不同颜色编码；所述anti-tag 序列选自SEQ ID NO.17～SEQ ID NO.24中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所 选的tag序列互补配对；

(C).用于扩增具有：A118G、IVS2+G31A、IVS2+G691C和/或IVS3+A6151G SNP位点的 OPRM1基因目标序列的扩增引物。