[发明专利]番茄谷氧还蛋白基因SlGRX1及其克隆方法和用途无效

专利信息
申请号: 201010148543.X 申请日: 2010-04-16
公开(公告)号: CN101845443A 公开(公告)日: 2010-09-29
发明(设计)人: 周雪平;郭玉双;吴建祥 申请(专利权)人: 浙江大学
主分类号: C12N15/29 分类号: C12N15/29;C12N15/10;C07K14/415;A01H5/00
代理公司: 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人: 张法高
地址: 310027 浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 番茄 谷氧还 蛋白 基因 slgrx1 及其 克隆 方法 用途
【权利要求书】:

1.一种植物谷氧还蛋白基因SlGRX1,其特征在于具有如SEQ ID NO:1所示1003个碱基DNA序列,编码具有抗氧化、干旱及盐碱能力的CGFS类的谷氧还蛋白。

2.一种如权利要求1所述植物谷氧还蛋白基因SlGRX1的克隆方法,其特征在于包括下列步骤:

1)根据拟南芥和水稻的CGFS类谷氧还蛋白基因,对其进行多序列比对,根据保守的同源序列设计了一对简并引物,上游引物T1为5’-SAAAGTGGTTCTSTWYATGAARGG-3’,下游引物T2为5’-ATATCWSAACCACCGAMMARYTC-3’,其中,W代表T或者A,S代表G或者C,M代表A或者C,R代表A或者G,Y代表C或者T,N代表A或者C或者G或者T,M代表A或者C,R代表A或者G,Y代表C或者T,D代表A或者G或者T;

2)用上述引物经RT-PCR扩增基因片段,经测序后与NCBI等网上数据库进行同源性比对,证明得到的片段为为番茄的谷氧还蛋白基因的片段;

3)以上述扩增的基因片段为种子序列,采用电子克隆的方法,在番茄的EST数据库中进行电子延伸拼接,根据延伸的序列设计引物,上游引物YGS2为5’-CATGGCGACCTTCAACATCTC-3’,下游引物YGAS为5’-AATGAATTTTCTTCAAACTATTGC-3’,利用RT-PCR克隆获得到1003bp的基因片段,将该片段克隆到PGEM-T easy载体上测序,得到的基因命名为SlGRX1。

3.一种番茄CGFS类蛋白,其特征在于,具有权利要求1所述植物谷氧还蛋白基因SlGRX1编码的如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列,或者与其氨基酸序列至少60%同源性。

4.一种如权利要求1所述植物谷氧还蛋白基因SlGRX1的用途,其特征在于用于经转基因或杂交育种改良植物的抗氧化、干旱及盐碱的能力。

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