[发明专利]携带修饰物的核苷酸及其制备方法和用于基因测序的方法

权利要求书

1.一种携带修饰物的核苷酸，结构通式如下：

dNTP-R；

式中dNTP为核苷酸，其特征在于：

修饰物-R连接在核苷酸中除脱氧核糖上-OH以外的位置，其包含至少一个可切除位点、至少一个标记物。

2.根据权利要求1所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，-R的结构为：-R₁-R₂；

其中，-R₁为第一修饰物，连接在碱基上；

-R₂是第二修饰物，包含一个可切除位点、一个标记物。

3.根据权利要求2所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述第一修饰物-R₁携带氨基末端，第二修饰物-R₂携带醛基末端，两者以酯键结合成为所述修饰物-R。

4.根据权利要求3所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述第一修饰物-R₁的结构是长度为n的碳链并结合氨基末端，即：

-C_nH_m-NH-，其中n、m均为正整数。

5.根据权利要求2所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述第二修饰物-R₂的结构为：-R₂₁-R₂₂；

其中，-R₂₁是可切除位点；-R₂₂是标记物。

6.根据权利要求5所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述可切除位点-R₂₁的结构由双硫键构成，即：-S-S-，可通过还原剂打开。

7.根据权利要求5所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述可切除位点-R₂₁为吡喃醇结构，即：

可在其6h位置的C-O键打开。

8.根据权利要求5所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，所述标记物-R₂₂包括荧光标记物，或生物素标记物。

9.根据权利要求1所述的携带修饰物的核苷酸，其特征在于，核苷酸dNTP包括：dATP、dGTP、dCTP、dUTP。

10.一种携带修饰物的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将脱氧核糖上-OH以外的位置连有第一修饰物-R₁的核苷酸，与带有可切除位点的第二修饰物-R₂进行反应，结合成为携带修饰物的核苷酸dNTP-R。

11.根据权利要求10所述的携带修饰物的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

A.将第一修饰物-R₁连接到核苷酸中除脱氧核糖上-OH以外的位置，生成dNTP-R₁；

B.对标记物进行修饰，生成带有一可切除位点的第二修饰物-R₂；

C.将连有第一修饰物的核苷酸dNTP-R₁与第二修饰物-R₂结合，生成所述携带修饰物的核苷酸dNTP-R；

其中，所述步骤A和B无先后顺序。

12.根据权利要求11所述的携带修饰物的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

A1.将携带氨基末端的第一修饰物-R₁连接到核苷酸中除脱氧核糖上-OH以外的位置；

B1.对标记物进行修饰，生成带有一可切除位点及醛基末端的第二修饰物-R₂；

C1.将步骤A1中携带氨基末端的核苷酸，与携带醛基末端的第二修饰物-R₂进行反应，以酯键结合，生成所述携带修饰物的核苷酸；

其中，所述步骤A1和B1无先后顺序。

13.根据权利要求12所述的携带修饰物的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述步骤A1包括：

将结构为-C_nH_m-NH₂的氨基修饰物结合到核苷酸中的碱基上，其中n、m均为正整数。