[发明专利]因子VII多肽的稳定化固体组合物

说明书

本申请是申请号为038173735(PCT/DK2003/000419)、申请日为2003年6月20日、发明名称为“因子VII多肽的稳定化固体组合物”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及包含因子VII或因子VII相关多肽的化学和物理上稳定的组合物，使得这些组合物能够在室温进行贮藏、操作、和使用。

背景技术

因子VII是参与血液凝结过程的多肽。现在，可以通过重组技术来生产因子VIIa(rFVIIa)，而且它广泛用作前止血剂。美国专利号4,784,950已经描述了(人野生型)因子VII。现在，rFVIIa为发生出血的血友病个体提供了快速且高效的前止血响应。有利的是，rFVIIa可用于治疗因抗体形成而不能用其它凝血因子产品进行治疗的血友病个体。同样，患有因子VII缺陷的个体或者具有正常凝血系统但仍发生过度出血的个体也可用rFVIIa成功治疗。

在开发包含多肽诸如例如因子VIIa的药物时需要考虑几个参数。例如，药物必须是有效的、安全的、且具有良好患者顺应性。此外，可以使用制药学可接受赋形剂配制成肠胃外施用的药物，这必须获得各种全世界医学管理机构的批准。为了肠胃外施用的目的，非常希望配方是大致等渗的，而且配方的pH能使得在注射/灌输后处于生理学合适范围内，否则它可能导致患者疼痛和不适。关于蛋白质配方的一般综述参阅例如Cleland等人，《The development of stable protein formulations：A closerlook at protein aggregation，deamidation and oxidation》即稳定蛋白质配方的开发：对蛋白质聚集、脱酰胺、和氧化的密切关注，CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1993，10(4)：307-377；和Wang等人，《Parenteral formulations of proteins and peptides： Stability and stabilizers》即蛋白质和肽的肠胃外配方：稳定性和稳定剂，Journal of Parenteral Science and Technology，1988(增刊)，42(2S)。

然而，对于包含多肽的药物而言，安全性可能与多肽的物理和化学稳定性直接相关。作为多肽，因子VII或因子VII相关多肽易受物理降解的影响，包括变性和聚集，诸如形成可溶性或不溶性的二聚体、寡聚物、和多聚物形式的聚集体；或者易受化学降解的影响，包括例如水解、脱酰胺、和氧化。因此，所述物理和化学不稳定性可能导致因子VII多肽活性的损失、有毒且免疫原性降解产物的形成、在注射降解的因子VII多肽后诱发血栓症的严重风险、堵塞用于注射的针头和非均质的风险等。

因此，至关重要的是提供包含在物理和化学降解方面被稳定化的因子VII多肽的组合物。

现在以冻干产品形式提供的重组生产的FVII多肽意欲贮藏于大约2℃-大约8℃。对冷却条件的要求造成了对制造商或供应商以及终端用户(患者)的负担和不便。

目前，重组生产的FVII产品有NovoSeven(Novo Nordisk A/S，丹麦)，它包含1.2mg重组人因子VIIa、5.84mg NaCl、2.94mg CaCl₂·2H₂O、2.64mg甘氨酰甘氨酸、0.14mg聚山梨酸酯80、和60.0mg甘露醇。加入2.0ml注射用水(WFI)复水后，pH是5.5，而且由此配制的含FVII溶液足以在室温稳定24小时。

本发明的研究人员发现，将冻干的NovoSeven产品于25℃贮藏6个月后，占初始含量大约6-7％w/w的rFVIIa以聚集体的形式存在。

因此，包含因子VII多肽的组合物需要稳定化，从而能够在环境温度进行贮藏和操作。然而，多肽的不稳定性涉及几个参数，而且不可能预测将因子VIIa或因子VII相关多肽稳定化的正确方式。

将蛋白质稳定化的一种方法涉及将蛋白质脱水，例如诸如以冻干块的形式提供蛋白质，即在冻干处理后获得的最终物质。然而，冻干处理自身对蛋白质有害；在冻干过程中，首先冷却蛋白质溶液直至充分冻结，蛋白质溶液中大量的水将在此阶段结冰。因此，蛋白质易受由冷冻诱导的压力，导致变形和沉淀。在下一步中，即所谓的第一干燥阶段，冰升华；而在第二干燥阶段，在较高温度下除去吸附或结合水。在此脱水过程中，蛋白质 可能松开主要由氢键提供的正确构象。