[发明专利]一种抗双酚A单克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种抗双酚A单克隆抗体的制备方法，其特征在于首先合成出双酚A半抗原，再将双酚A半抗原分别与牛血清白蛋白和鸡卵清白蛋白欧联，得到人工免疫抗原和人工包被抗原；将双酚A人工免疫抗原免疫小鼠制备脾细胞悬液，在聚乙二醇作用下融合小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，经杂交瘤技术检测和多次亚克隆后得到能稳定分泌双酚A抗体的阳性杂交瘤细胞。

2.根据权利要求1所述的双酚A单克隆抗体的制备方法，其特征在于具体的制备步骤如下：

1)双酚A人工免疫抗原和包被抗原的合成：首先对双酚A进行结构修饰，引入羧基基团，采用碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺混合法将结构修饰了的双酚A分别与牛血清白蛋白和鸡卵清白蛋白偶联制备双酚A人工免疫抗原和包被抗原；

2)双酚A单克隆抗体细胞株的制备及筛选：用合成的双酚A人工免疫抗原免疫小鼠，制备脾细胞悬液，在质量浓度50％聚乙二醇作用下融合小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0并以次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶脱氧核苷培养基选择性培养融合细胞，间接酶联免疫吸附试验检测和间接竞争酶联免疫吸附试验检测出阳性杂交瘤细胞，再经过多次有限稀释克隆后得到的阳性杂交瘤细胞能稳定分泌双酚A抗体；

3)双酚A单克隆抗体的制备纯化：用扩增培养后的阳性杂交瘤细胞诱导Balb/c小鼠产生腹水，收集小鼠腹水并用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水得到了双酚A单克隆抗体，聚丙烯酰氨凝胶电泳检测纯化后抗体的纯度；

4)双酚A单克隆抗体的鉴定：阳性杂交瘤细胞分泌的双酚A单克隆抗体，经鼠单克隆抗体亚类试纸检测结果表明属于IgG1亚类，其轻链为Kappa；间接ELISA和间接竞争ELISA证实该类抗体只与双酚A有特异性结合，而不与载体蛋白反应，表明单克隆细胞分泌的抗体是特异性抗双酚A的。