[发明专利]人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法和外源蛋白表达盒、表达系统

权利要求书

1.一种外源蛋白表达盒，包含以下元件：a)标记基因序列；b)源自甲醇酵母菌的启动子区域，其包含启动子序列b1和任选的该启动子上游序列b2；c)外源蛋白的DNA序列；d)源自甲醇酵母菌的终止子区域，其包含终止子序列d1和任选的该终止子下游序列d2，其中b)位于c)的上游并且所述d)位于c)的下游，

其特征在于，

所述标记基因序列为编码甲醇酵母菌的LEU、URA、TRP、LYS、HIS或ADE的DNA序列；并且该标记基因序列位于所述b1和所述b2之间，或者位于所述d1和所述d2之间；并且

所述外源蛋白为人乳头瘤病毒的结构蛋白L1或L2。

2.根据权利要求1所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述源自甲醇酵母菌的启动子区域包含启动子序列b1和该启动子上游序列b2，并且所述源自甲醇酵母菌的终止子区域包含终止子序列d1和该终止子下游序列d2。

3.根据权利要求1所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述人乳头瘤病毒为人乳头瘤病毒亚型6、11、16、18、33、52、或58。

4.根据权利要求1所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述甲醇酵母菌为汉逊酵母菌、毕赤酵母菌或酿酒酵母菌。

5.根据权利要求1所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述源自甲醇酵母菌的启动子选自：假丝酵母菌、球拟酵母菌、汉逊酵母菌和毕赤酵母菌的真核启动子。

6.根据权利要求5所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述源自甲醇酵母菌的启动子选自：甲醇氧化酶启动子、二羟丙酮合成酶启动子、过氧化氢酶启动子、甲醇脱氢酶启动子、和甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因启动子。

7.根据权利要求1所述的外源蛋白表达盒，其特征在于，所述源自甲醇酵母菌的终止子选自：甲醇氧化酶终止子、二羟丙酮合成酶终止子、过氧化氢酶终止子、甲醇脱氢酶终止子、和甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因终止子。

8.一种双缺陷型甲醇酵母菌表达系统，包含：

1)两种权利要求1至7中任意一项所述的外源蛋白表达盒，其中一种所述外源蛋白表达盒的外源蛋白的DNA序列为人乳头瘤病毒的结构蛋白L1的DNA序列，另一种所述外源蛋白表达盒的外源蛋白的DNA序列为人乳头瘤病毒的结构蛋白L2的DNA序列；和

2)双缺陷型甲醇酵母菌，其中，

所述双缺陷型甲醇酵母菌是这样的原生型甲醇酵母菌，该原生型甲醇酵母菌的LEU、URA、TRP、LYS、HIS和ADE编码基因中的两个具有缺陷；

所述两种外源蛋白表达盒中的所述标志基因序列分别与所述双缺陷型甲醇酵母菌中的缺陷的DNA序列是同源的，以及1)中所述的两种外源蛋白表达盒同时包含在2)中所述的双缺陷型甲醇酵母菌的同一细胞中。

9.根据权利要求8所述的双缺陷型甲醇酵母菌表达系统，其特征在于，所述双缺陷型甲醇酵母菌为这样的多形汉逊酵母菌(Hansenula polymorpha)，该多形汉逊酵母菌的乳清酸苷-5-磷酸脱羧酶基因第35位由A突变为G，并且β-异丙基苹果酸脱氢酶基因的第603位到第1912位发生基因缺失。

10.一种人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法，该方法包括：使人乳头瘤病毒的结构蛋白L1和L2在权利要求8所述的双缺陷型甲醇酵母菌表达系统中共表达。