[发明专利]基于荧光共振能量转移的多组分同时检测的均相免疫分析方法

权利要求书

1.一种基于荧光共振能量转移的均相时间分辨荧光多组分同时检测方法，其特征在于， 以高量子产率的荧光物质为能量供体，以两种宽激发的荧光染料为能量受体，按下列步骤 操作：

步骤一：用同一种所述的能量供体标记两种待测抗原，用不同的能量受体分别标记相 应的两种抗体，得到标记组分，且所述的作为能量供体和能量受体的荧光物质为符合FRET 特征的试剂对；

步骤二：配制五个已知浓度梯度的两种待测抗原溶液，令步骤一得到的标记组分与该 已知浓度梯度的两种待测抗原溶液进行均相竞争免疫反应，反应过程如下：将步骤一得到 的标记组分与待测抗原溶液在pH6-8的缓冲液中混合均匀，25℃温育30分钟，得到混合体 系；

步骤三：免疫反应完成后，以所用能量供体的最大激发波长为激发光，以所用的不同 能量受体的发射波长检测混合体系的荧光强度，得到各种能量受体的荧光光谱数据；

步骤四：依据各种能量受体的荧光光谱数据，采用去卷积法，计算得到所用能量受体 的相对荧光强度；

步骤五：制作待测抗原的标准曲线，进行公式拟合，分别得到各种待测抗原浓度的计 算公式；

步骤六：令未知浓度的两种待测抗原与标记组分重复以上步骤二、步骤三、步骤四， 将最终得到的相对荧光强度代入上述步骤五得到的拟合公式中计算即得到各待测抗原的浓 度。

2.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于，作为能量供体的荧光物质是稀土元 素。

3.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于，作为能量受体的是宽激发的荧光染 料。

4.按照权利要求3所述的分析方法，其特征在于，所述的宽激发的荧光材料是量子点、 双光子试剂或荧光蛋白。

5.按照权利要求2所述的分析方法，其特征在于，作为能量供体的稀土元素离子是 Tb³⁺、Dy³⁺、Sm³⁺或Eu³⁺。

6.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述的待测的两种抗原是具有抗原决定 簇的物质。