[发明专利]慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于血液肿瘤免疫治疗技术领域，特别涉及一种慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA及其制备方法和应用。

背景技术

目前，对于慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia，CML)的治疗主要有传统化疗、IFN-α和酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗等。虽然这些治疗方法已经能够在很大程度上提高患者的生存质量，患者的预后也有了较大改善，但肿瘤的微小残留病变(minimal residual disease，MRD)却很难被现行治疗方案根除。造血干细胞移植虽然能够根除MRD，但骨髓来源少，配型成功率低，高昂的移植费用以及严重的移植相关并发症限制了该疗法的推广。由于许多白血病患者体内都存在由于染色体易位所形成的融合基因，利用融合基因作为诱导产生特异性抗白血病治疗的靶点已经成为众多研究人员追求的目标。由于体外表达的蛋白不一定具有与体内蛋白一致的天然构象，而且外源蛋白进入体内后以诱导体液免疫反应为主，而DNA疫苗则能够有效地克服这些缺陷，同时诱导体液免疫和细胞免疫。在常规治疗结束后辅以CML特异的DNA疫苗治疗是有希望根除MRD的方法之一。

BCR/ABL融合基因是CML发病以及应用酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼治疗有效的分子基础，是一个特异的白血病抗原。表达BCR/ABL融合基因的细胞可诱导T细胞克隆性增殖，提示该细胞内的融合蛋白可以被MHC分子加工和提呈到细胞表面，因此可以利用BCR/ABL融合蛋白或融合基因诱导机体产生特异性免疫应答，或者诱导机体产生针对BCR/ABL的特异性CTL，达到免疫治疗的目的。Ji等研究发现利用跨越BCR/ABL融合基因的融合点的基因片段构建的DNA疫苗能够在小鼠体内诱导产生特异性免疫保护作用。利用BCR/ABL融合基因制备DNA疫苗是有希望根除CML的MRD的方法之一。

但单独的多肽疫苗所产生的免疫效应较弱，寻找合适的免疫佐剂成为临床实际应用必须要解决的重点所在。超抗原可与抗原提呈细胞表面的MHC-II类分子及TCRVβ区CDR3外侧区域结合，而不涉及TCRVβ区CDR3及TCRα的识别，这种激活T细胞的独特方式可产生极强的免疫应答。目前较有研究基础的超抗原主要是金黄色葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal Enterotoxin A，SEA)等，SEA强大的T细胞激活功能使其成为CML免疫治疗的佐剂。

目前对于制备BCR/ABL基因疫苗特异性目的基因的选择尚无定论，如何筛选出具有最佳免疫原性的BCR/ABL基因片段仍是此类研究所面临的核心问题。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA。该DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA是能够在真核细胞内同时表达BCR/ABL和SEA蛋白的质粒。

本发明的另一目的在于提供上述慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA的应用。所述用于慢性粒细胞白血病特异免疫治疗的DNA疫苗是一种能够在真核细胞中同时表达BCR/ABL蛋白和SEA蛋白的DNA疫苗，它能够诱导CML患者机体产生针对CML细胞的特异性CTL，从而清除患者体内的微小残留病变，达到治愈CML的目的。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：一种慢性粒细胞白血病DNA疫苗BCR/ABL-pIRES-SEA，含有pIRES质粒、BCR/ABL基因和SEA基因，BCR/ABL基因和SEA基因分别位于pIRES质粒上的IRES元件两侧的多克隆位点上；其中，pIRES质粒为商业性的质粒，含有多克隆位点A(MCS A)、多克隆位点B(MCS B)和IRES元件，MCS A和MCS B分别位于IRES元件的两侧，BCR/ABL基因可以位于MCS A或MCS B上，SEA基因可以位于MCS A或MCS B上；

所述BCR/ABL基因(大小为336bp)的核苷酸序列如下：

CCTTCAGCGGCCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGTCTGAGTGAAGCCGCTCGTTGGAACTCCA

AGGAAAACCTTCTCGCTGGACCCAGTGAAAATGACCCCAACCTTTTCGTTGCACTGTATGATTTTGTG