[发明专利]果蔗腋芽脱毒组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及甘蔗脱毒组培技术领域。

背景技术

甘蔗(含果蔗)宿根矮化病在中国主产蔗区及世界各地蔗区广泛发生已有多年，导 致品种种性退化，严重影响甘蔗品质和产量。

获得甘蔗无病毒(菌)植株的方法有多种，例如热处理脱毒(菌)、茎尖培养脱毒(菌) 和愈伤组织培养脱毒以及组合方法。其中普遍采用的较好方法为茎尖培养脱毒(菌)法， 具体步骤是：通过蔗株顶端分生组织切取茎尖(0.2mm以下分生组织)、诱导产生幼芽、 长成小植株获得脱毒苗。茎尖分生组织脱毒法存在的问题是：要切取很微小(0.2mm以 下)的茎尖分生组织，需在显微镜下操作，具有一定难度；而且，切取茎尖组织越小， 褐化率越高、成活率就越低，而切取茎尖组织偏大，又不能完全脱除病毒(菌)，同时容 易造成污染；因此，生产上迫切需要一种更好的方法来满足甘蔗或果蔗脱毒(菌)组培 快繁的需要。

发明内容

本发明目的是提出一种果蔗脱毒组培快繁方法，以切取较大的果蔗植株腋芽为外植 体，先诱导腋芽萌动，再分化形成完整植株，其能够在短期内而且较为容易获得大量的 无病毒(菌)果蔗组培苗，克服茎尖分生组织脱毒(菌)法存在的操作难度大、成活率 低、生产成本偏高等问题。

本发明的目的通过以下技术方案来实现。

一种果蔗脱毒组培快繁的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)植体的选取与灭菌：取果蔗的腋芽，经灭菌处理后，作为所用外植体；

2)腋芽诱导培养：将步骤1)处理后的腋芽在无菌条件下，摘取腋芽组织，接种在 腋芽诱导培养基上，诱导芽生成；

3)分化培养：将步骤2)形成的诱导芽移至分化培养基分化出丛芽；

4)增殖培养：将步骤3)分化形成的丛芽切成每2～3株为一组接在增殖培养基中， 再分化出丛芽；

5)生根培养：将步骤4)增殖形成的丛芽切成单株接种在生根培养基中进行生根培 养，生根组培苗生成；

6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至3～5cm时，将生根组培苗移栽于移栽基质 培养至成苗；

7)病毒(菌)检测：利用PCR技术对步骤5)的成苗进行RSD菌检测。

其特征在于步骤3)中的分化培养基配方为：

MS+TDZ(0.001～0.01)mg/L+IBA(0.02～0.05)mg/L+蔗糖(30～40)g/L+精 氨酸(100～150)mg/L+肌醇(100～150)mg/L。

本发明具有如下突出的实质性特点和显著进步：

1)本发明以果蔗腋芽为外植体，培养时，取材的体积较大(2～3mm)，接种操作容易， 成活率高达90％以上。

2)本发明采用的分化培养基配方，在分化培养过程中能快速使诱导芽分化出丛芽，采用 本发明繁殖果蔗脱毒苗速度快，月繁殖系数达5～10倍，适合于大规模工厂化生产。

附图说明

图1为本发明的实施例检测结果(琼脂糖凝胶电泳图)。

检测对照材料：以甘蔗宿根矮化病菌分离培养菌株、带病菌植株为材料。(目的片段 约256bp)

图片说明：1、15为DL2000，2为RSD菌株，3为清水对照，4为带RSD菌果蔗植 株，5-14为随机抽取的十株果蔗腋芽组培苗。

具体实施方式

通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

一种果蔗脱毒组培快繁的方法，按如下步骤进行：

1)外植体的选取与灭菌：于7～11月，取果蔗的腋芽，经75％酒精浸泡0.5～1.0min， 再用0.1％汞溶液处理3～4min后，无菌水冲洗3～5次。

2)腋芽诱导培养：将步骤1)处理后的腋芽在无菌条件下，摘取2～3mm的腋芽，小心 去除叶鞘，接种在液态腋芽诱导培养基(MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.02mg/L+ 活性炭1g/L+蔗糖30g/L+精氨酸100mg/L+肌醇100mg/L+琼脂5g/L)的上，诱导 芽生成。

3)分化培养：将步骤2)诱导形成的诱导芽移至分化培养基(MS+TDZ 0.003mg/L+ IBA 0.02mg/L+蔗糖30g/L+精氨酸100mg/L+肌醇100mg/L+琼脂5g/L)上诱导出 丛芽。