[发明专利]一种人小RNA-148a表达载体及应用有效
| 申请号： | 201010161597.X | 申请日： | 2010-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN101831461A | 公开（公告）日： | 2010-09-15 |
| 发明（设计）人： | 来茂德;张红河 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;A61P1/00 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 rna 148 表达 载体 应用 | ||
1.一种人小RNA-148a表达载体，是根据人小RNA-148a的前体序列设计并合成寡核苷酸片段，装载入pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR表达载体，具有SEQ ID №：1和SEQ ID №：2的互补寡核苷酸序列，SEQ ID №：1：
5’-TGCTGAGGCAAAGTTCTGAGACACTCCGACTCTGAGTATGATAGAAGTCAGTGCACTACAGAACTTTGTCTC-3’
SEQ ID №：2：
5’-CCTGGAGACAAAGTTCTGTAGTGCACTGACTTCTATCATACTCAGAGTCGGAGTGTCTCAGAACTTTGCCTC-3’；
通过以下方法构建：合成SEQ ID №：1和SEQ ID №：2两条寡核苷酸片段，将上述合成好的寡核苷酸用双蒸水溶解成100uM，各取5μl混匀，加入退火缓冲液2μl，用双蒸水补足20μl，95℃加热5分钟，然后放置室温自然冷却20分钟，将退火后的双链寡核苷酸稀释至10nM，取4μl与2μlpcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR载体混合，加入4μl连接缓冲液，用双蒸水补足20μl后16℃过夜，将连接产物加入200μl制备好的感受态大肠杆菌中，冰浴30分钟后42℃热激90秒后冰浴3分钟；加入800μl LB液体培养基，37℃，150转/分钟摇菌1个小时后取200μl菌液均匀涂布于大观霉素阳性的LB琼脂培养板上，倒置平板，37℃培养箱内12-16h，每个转化平板分别挑取3个克隆进行测序，以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的寡核苷酸序列一致。
2.根据权利要求1所述的一种人小RNA-148a表达载体在制备促进结直肠癌细胞凋亡药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的一种人小RNA-148a表达载体在制备以BCL2基因为靶基因的抗肿瘤药物中的应用。
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