[发明专利]酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌全细胞混悬液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤作用的药物的制备方法，特别涉及酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌全细胞混悬液的制备方法。

背景技术

近年来，我国每年新增肿瘤患者160万-170万人，总数在450万人左右。其发病率和死亡率均呈现上升趋势。国家卫生部发布的《2009年中国卫生统计提要》显示，2008年部分市县前十位疾病死亡专率中，恶性肿瘤居于首位，已成为危害人类健康的头号杀手。

目前现有技术中已存在许多抗肿瘤化疗药物，而且有更多的化合物已被发现具有抗肿瘤作用。但是，大多数抗肿瘤药物由于缺乏理想的选择性，在抑制或杀伤肿瘤细胞的同时，对人体正常组织细胞也具有抑制或损伤作用，因而具有较多的副作用，如蒽环类抗癌抗生素阿霉素的心脏毒性、顺铂加环磷酰胺化疗方案所致骨髓毒性的作用、顺铂治疗卵巢癌或睾丸癌所诱导的神经毒性及其肾毒性等。除化疗药物外，肿瘤的放射疗法及手术治疗目前也很难达到理想的效果。因此，肿瘤治疗新方法及新药物的研发成为国内外医药领域的研发热点。

随着细菌生物学和分子生物学的发展，人们认识到许多细菌(如幽门螺杆菌)可以引起肿瘤，同时，一些细菌及其产物也具有肿瘤抑制作用。早在200年前，人们就已经发现某些肿瘤患者在急性细菌感染后，肿瘤生长被抑制(韩景田，张国辉综述，董小青审校.细菌及其产物对肿瘤的影响研究进展.武警医学院学报.2009年2月，第18卷，第2期，159-161页)。二十世纪八十年代，皮肤病专家发现细菌感染引发的痤疮患者患皮肤癌、淋巴癌和白血病的几率相对较低，并且这些细菌注入动物体内会导致肿瘤萎缩。对细菌的不同组分进行分离并进行实验发现，细菌所含的脂多糖是其肿瘤抑制作用的活性组分。由于自然科学的发展、基础理论研究与新技术的应用，肿瘤学研究有了长足的进步，细菌及其产物对肿瘤的治疗作用成为该研究领域的热门课题之一。

在肿瘤细胞发生发展的过程中，由于基因突变等原因肿瘤细胞会表达一些新的抗原。这些新抗原作为“非己”物质，可以被机体的免疫系统识别和杀伤。然而肿瘤在人体免疫功能作用下仍能发展、转移，表明肿瘤也有自己的保护机制。当机体发生肿瘤时，肿瘤细胞可以凭借多种方式逃避免疫系统的监控而分裂生长，即肿瘤的免疫逃逸(丁红仙.肿瘤免疫逃逸机制的研究进展.海峡药学.2008年，第20卷，第7期，12-14页)。肿瘤细胞通过自分泌-旁分泌途径能分泌免疫抑制性细胞因子，如转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF)和IL-4等，使肿瘤局部形成深度免疫抑制区，不仅使身在其中的免疫细胞功能受到严重抑制，甚至功能正常、活化的免疫细胞，一旦进入此环境也将成为免疫功能抑制的“沉默”细胞，是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一(Colombo MP，Piconese S.Regulatory-T-cell inhibition versus depletion：the right choice in cancer immunotherapy.Nat RevCancer.2007 Nov；7(11)：880-7.)。TGF-β是介导肿瘤免疫逃逸最有效的免疫抑制分子，能广泛抑制肿瘤患者的免疫系统，可以抑制T细胞增殖，抑制IL-1β、IL-2受体的表达，拮抗抑制γ干扰素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等的免疫效应。IL-10可阻抑抗原递呈细胞(APC)在肿瘤组织的浸润、分化、成熟及对抗原的趋化反应，诱导其表面CD86、CD40、CD54分子、HLA-I及HLA-II类分子低表达或不表达，直接或通过功能缺陷型APC使细胞毒T淋巴细胞(CTL)处于免疫无能状态。VEGF可影响树突状细胞的分化与成熟，阻碍其抗原递呈功能，进一步影响CTL的扩增、活化及瘤细胞对CTL杀伤的敏感性，还可通过上调B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)的表达，抑制瘤细胞凋亡，在一定程度上限制了机体的有效抗肿瘤免疫。

经研究，已经发现多种细菌及其产物具有诱导机体抗肿瘤免疫，抑制肿瘤生长的药理活性，比如：李斯特菌是一种广泛存在于自然界的革兰阳性菌，可感APC，激发强烈的细胞免疫，CD4和CD8+T细胞介导的细胞免疫是其特。即使高度减毒的李斯特菌在免疫治疗中仍具有的抗肿瘤效能(Paterson Y，Maciag PC.Listeria-based vaccines for cancer treatment.Curr OpinMol Ther.2005 Oct；7(5)：454-60)。