[发明专利]环阿尔廷型三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及皂苷类化合物及其制备，具体涉及环阿尔 廷型三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用。

背景技术

环阿尔廷类(9，19-cycloartane)化合物为羊毛甾烷型四环三萜类化合物。近 几十年来，发现了大量的环阿尔廷苷类。已分离得到的环阿尔廷类化合物主要 来自植物界，如豆科的紫云英属(Astragalus)、毛莨科的升麻属(Cimicifugeae)和 唐松草属(Thalictrum)等。

环阿尔廷类化合物是中药升麻和黄芪的主要成分。近年来的研究表明其有 多方面的药理活性。文献报道紫云英属植物Astragalus oleifolius具有止汗、利尿 的作用，并对肾炎、糖尿病、白血病、子宫癌有疗效，其主要成分中包括环阿 尔廷三萜；紫云英属植物Astragalus spinous在埃及的民间用来治疗高血压、白 血病和子宫癌，Astragalus verrucosus的醇提取物分别具有免疫增强作用和免疫 调节作用，其主要成分中均包括环阿尔廷三萜。总之，对富含环阿尔廷三萜的 植物总提取物活性研究较多，而对单体化合物的研究较少，限制了这类成分在 新药研发中的应用。

为了能更充分的研究这类天然产物的药理活性，我们总结发现了一种快速、 大量从植物界分离制备环阿尔廷三萜皂苷类化合物并检测其抗肿瘤活性的方 法。

发明内容

本发明的目的是提供了环阿尔廷型三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用。

本发明提供了环阿尔廷型三萜皂苷类化合物，该皂苷具有如下结构通式：

式中：R₁为H或者OH；R₂为CH₃或者CH₂OH；R为糖基；糖基的数目 为1-5个；糖的种类有葡萄糖，鼠李糖，木糖，阿拉伯糖；糖之间的连接方式有 1-2位连接，1-4位连接，1-3位连接和1-6位连接。

本发明提供的环阿尔廷型三萜皂苷类化合物的制备方法，可以通过以下两 种方法中任意一种制备环阿尔廷型三萜皂苷类化合物，

方法一：

(1)粉碎选定的中药，然后利用闪式提取技术或溶剂提取法，采用 50％-100％的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液至醇浓度低于5％，离心后取上 清液；

(2)上清液经非极性大孔树脂柱(非极性大孔吸附树脂，如 D101，HPD100，HPD400，AB-8等型号)色谱处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗 脱部位利用LC-MS技术筛选富集环阿尔廷型三萜皂苷类成分的有效部位，得到 30％-100％醇洗脱下来的流分为环阿尔廷型三萜皂苷类成分的有效部位，即粗总 皂苷；

(3)粗总皂苷经硅胶闪烁柱色谱法快速处理，以氯仿、甲醇、丙酮、乙酸 乙酯、乙醇一些有机溶剂或混合溶剂(两种混合，比例10∶1～1∶10)梯度洗 脱，各洗脱流分利用LC-MS技术筛选富集环阿尔廷型三萜皂苷类成分的流分

(4)上述步骤(3)中所得流分经中低压柱色谱或开口ODS柱色谱柱进一 步分离纯化，以甲醇/水或乙醇/水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分经半制备 或制备型HPLC色谱分离，以甲醇/水，乙腈/水或甲醇/乙腈/水为流动相洗脱， 得到环阿尔廷型三萜皂苷类化合物；

方法二：

(1)粉碎选定的中药，然后利用闪式提取技术或溶剂提取法，采用 50％-100％的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液至醇浓度低于5％，提取液分别 用氯仿或二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取2到5次，萃取溶剂与提取液体积 比1∶3～3∶1，回收溶剂，收集得到氯仿或二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物。

(2)正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理，依次用水和醇梯度洗脱， 各洗脱部位利用LC-MS技术筛选富集环阿尔廷型三萜皂苷类成分的有效部位， 得到30％-100％醇洗脱下来的流分为环阿尔廷型三萜皂苷类成分的有效部位，即 粗总皂苷；

(3)乙酸乙酯萃取物和步骤(2)中所得粗总皂苷分别经硅胶闪烁柱色谱 法快速处理，各洗脱流分利用LC-MS技术筛选富集环阿尔廷型三萜皂苷类成分 的流分；