[发明专利]一种纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法

权利要求书

1.一种纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法，其特征在于，该方法包括：利用阳离子交换层析从CHO细胞培养上清中回收尿激酶原的步骤；利用疏水层析从粗产品中除去部分杂蛋白的步骤；利用凝胶过滤进一步纯化尿激酶原的步骤。

2.一种纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法，其特征在于，该方法包括：用Streamline-SP扩张床阳离子交换直接从CHO细胞培养上清中捕获尿激酶原；用Butyl-Sepharose 4 fast flow疏水层析从粗产品中除去部分细胞蛋白；用Sehacry1S-200凝胶过滤精细纯化尿激酶原。

3.根据权利要求2所述的纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法，其特征在于，所述用Streamline-SP扩张床阳离子交换直接从CHO细胞培养上清中捕获尿激酶原的步骤为：先将CHO基因工程细胞培养液，在4℃静置后，虹吸细胞培养上清，底部培养液通过3000g，4℃离心15min，除去细胞及碎片；然后上清液用6molHCl调至pH 5.8；用去离子水将扩张床扩至3倍柱床体积，再用0.01mol、pH 5.8的磷酸缓冲液，平衡Streamline-SP阳离子扩张床色谱柱3个柱体积，将细胞培养上清以流速30-60ml/min通过色谱柱，当细胞培养上清全部通过色谱柱后，再用平衡缓冲液冲洗色谱柱3-5个柱体积，然后改用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0，含0.1mol/L氯化钠)和0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0，含1mol/L氯化钠)进行梯度洗脱，用波长280nm的紫外检测仪监测蛋白吸收峰，收集洗脱蛋白吸收峰组分。

4.根据权利要求2所述的纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法，其特征在于，所述用Butyl-Sepharose 4 fast flow疏水层析从粗产品中除去部分细胞蛋白的步骤为：将阳离子交换获得的蛋白用0.05mol/L的磷酸盐缓冲液pH 7.0，稀释1倍，加入硫酸铵至1mol/L，疏水层析填料Butyl-Sepharose 4 fast flow，用水洗2-3个柱床体积，然后用1mol/L的硫酸铵平衡2-3个柱床体积，将加入1mol/L硫酸铵的样品上疏水层析填料；样品上完后用平衡柱床的1mol/L的硫酸铵继续冲洗至紫外检测仪到基线；然后用0.4mol/L的硫酸铵洗脱样品，用波长280nm的紫外检测仪监测蛋白吸收峰，收集洗脱蛋白吸收峰组分，将收集的蛋白作SDS-PAGE。

5.根据权利要求2所述的纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法，其特征在于，所述用Sehacry1 S-200凝胶过滤精细纯化尿激酶原的步骤为：将Sehacry1 S-200凝胶色谱柱置于4℃，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液平衡凝胶柱；然后将疏水层析收集的尿激酶原以不超过5％体积上样，继续用平衡缓冲液淋洗色谱柱，用波长280nm的紫外检测仪监测蛋白吸收峰，分别收集峰头、主峰和峰尾。