[发明专利]一种抗鸡球虫病的融合蛋白及其制备和应用

权利要求书

1.一种融合基因，其特征在于，所述融合基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述融合基因的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)采用RT-PCR方法扩增3-1E基因和TA4基因，并进行鉴定；

2)分别将3-1E基因和TA4基因连接到载体pMD18-T上，构建克隆载体pMD18-T-3-1E和pMD18-T-TA4；

3)以步骤2)所得载体pMD18-T-3-1E为模板，进行PCR扩增，上游引物为P5：5′-GCCGGATCCTTTCCTTACTCAGTTAAAATG-3′，下游引物P6：5′-ACCGCCAGAGCCACCTCCGCCTGAACCGCCTCCACCGAAGCCGCCCTGGTACAG-3′；

4)以步骤2)所得载体pMD18-T-TA4为模板，进行PCR扩增，上游引物P7：5′-GGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCGATGAACAAGCTGAGAAAAGCAGCAG-3′；下游引物为P8：5′-CATGTCGACCGCCGCCATATCTGTCCAAT-3′；

5)以步骤3)和步骤4)的PCR产物为模板，进行PCR扩增，上游引物为P5：5′-GCCGGATCCTTTCCTTACTCAGTTAAAATG-3′，下游引物为P8：5′-CATGTCGACCGCCG CCATATCTGTCCAAT-3′，得到3-1E-TA4融合基因。

3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒是指pET-32a-3-1E-TA4。

5.一种抗鸡球虫病的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由所述3-1E-TA4融合基因表达而得。

6.权利要求5所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将所述3-1E-TA4的融合基因连接到载体pMD18-T上，构建载体pMD18-T-3-1E-TA4；

2)对分别对所述载体pMD18-T-3-1E-TA4和表达载体pET-32a(+)进行双酶切，将回收的3-1E-TA4融合基因，与表达载体pET-32a(+)连接，连接产物经鉴定正确后，即得到重组质粒pET-32a-3-1E-TA4；

3)步骤2)所述的重组质粒pET-32a-3-1E-TA4转化大肠杆菌感受态细胞；

4)培养步骤3)所得大肠杆菌，制备与纯化融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌感受态细胞为BL21感受态细胞。

8.权利要求5所述融合蛋白在制备预防鸡艾美耳球虫病的药物中的应用。