[发明专利]丹参酮类化合物芯-壳结构复合纳米表面分子印记聚合物的制备方法

说明书

一、技术领域

本发明属于分子印记聚合物技术领域，尤其涉及对丹参酮类化合物具有特异性识别的分子印记聚合物的制备方法。

二、背景技术

丹参为唇形科植物丹参Salva miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有非常显著的扩张冠脉，改善微循环，保护心脏等作用，是临床最常用的活血化瘀中药之一。目前，丹参及其制剂已在全球十几个国家作为药品或食品添加剂销售与使用，得到了世界范围内广泛的认同。自20世纪30年代以来，人们对丹参单味药及其复方的化学成分、药理作用进行了大量的研究工作，发现脂溶性的丹参酮类化合物是丹参抗菌、抗癌、心脑血管活性的主要有效部位。目前已从丹参中发现了43个丹参酮类化合物，其中哪个成分是其真正的有效成分呢？药物口服后，大部分的化学成分不能被消化道吸收入血，只有进入血液的成分才有可能成为有效成分，即血清中含有真正的有效成分。因此，通过血清药物化学研究，对丹参酮类化合物在血清中的存在形式进行分析，可以快速有效地发现丹参真正的药效作用物质。

目前丹参酮类化合物在血浆、尿及粪便中的代谢研究已有报道，大多应用LC-MS、GC-MS、HPCE-MS等方法，对含药生物样品中丹参的相关代谢产物进行定性分析，并且主要是分析丹参酮IIA、隐丹参酮等含量较高的几种丹参酮类化合物，一些微量的代谢产物往往被丢失。在药物体内代谢研究中，不仅要了解代谢产物准确的化学结构、理化性质等相关信息，而且要比较进入血液后各组分的相对含量变化，对各组分的生物活性进行判断和预测。但是，由于血清中的活性成分有着含量低、组分多、分离难的特点，并且受到检测灵敏度的限制，许多真正的微量活性物质不容易被检测并分离出来，只能对一些含量较高的成分进行初步的结构推测工作。因此丹参的血清药物化学研究迫切需要一种高灵敏度的专一的现代分离检测方法。

近来，分子印记技术的发展将最有可能为我们分离工作提供功能强大的最优先和高效率的选择，分子印记聚合物既能够对丹参给药血清中丹参酮类化合物进行富集，也可对不同结构的代谢产物进行分离纯化，实现对微量成分的高效分离和检测，从而发现丹参给药血清中一些高活性的微量代谢产物。目前有一篇丹参酮分子印记聚合物分离的文献报道[乐康，付廷明，郭立玮。华西药学杂志，5(2009)443-445]。但这个分子印记聚合物是以本体聚合的方式进行制备，大量的印记结合点处于材料的内部，合成后清除其中全部模板分子非常困难，通常有5％的模板分子残留，去除后的亲和效率也很低。而应用分子印记技术来分离检测丹参在血清中的代谢组分的研究，尚未见报道。

三、发明内容

发明目的：针对目前丹参血清药物化学研究方法的不足以及传统分子印记聚合物自身的缺点，本发明提供了一种对丹参酮类化合物具有特异识别性能的表面分子印记聚合物及其制备方法。从而实现对丹参酮类化合物的高选择性分离、富集以及检测。

技术方案：丹参酮类化合物芯-壳结构复合纳米表面分子印记聚合物的制备方法，包括芯部单分散纳米二氧化硅颗粒的制备，制备步骤为：将制得的芯部单分散纳米二氧化硅颗粒进行表面接枝改性，所述接枝改性方法为：将芯部单分散纳米二氧化硅颗粒超声分散于MTPU的体积浓度为15％～25％的甲苯溶液中，搅拌下通氮气除氧，然后在55℃环境中搅拌回流24h，制得NanoSiO₂-MTPU，再依次用甲苯、甲醇超声洗涤、离心，除去未反应的MTPU，最后将所制得的NanoSiO₂-MTPU在40℃下真空干燥12h，备用；将模板分子、功能单体加入25mL致孔剂中混合，充分摇匀，25℃下放置4h，制得预组装溶液，模板分子为0.1114g丹参酮IIA，功能单体为甲基丙烯酸，致孔剂为乙腈，模板分子与功能单体的摩尔比为1∶3～1∶4；将NanoSiO₂-MTPU超声分散于另25mL致孔剂中；然后将预组装的溶液与分散在致孔剂中的NanoSiO₂-MTPU混合，加入交联剂和引发剂，搅拌通氮气除氧，在氮气保护下，升温引发聚合；交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；引发剂为偶氮二异丁腈，引发剂用量为功能单体与交联剂质量总量的5％，NanoSiO₂-MTPU颗粒的用量为0.1g对应0.1114g模板分子，对应50mL致孔剂；模板分子和交联剂的摩尔比为1∶5～1∶15；反应结束后离心除去上清液，产物用体积比为9∶1的甲醇-冰醋酸混合溶液反复超声洗涤，直至上清液紫外检测不到模板分子为止，然后真空干燥至恒重，得到丹参酮类化合物芯-壳结构复合纳米表面分子印记聚合物。