[发明专利]葡萄离体茎段的脱毒方法

权利要求书

1.一种葡萄离体茎段的脱毒方法，包括如下步骤：

1)选择继代培养至茎半木质化的葡萄品种或相关砧木的试管苗，无菌条件下剪取单芽茎段接种在培养基中，置于22-28℃、2000-3000lx培养室培养至刚露出小白根，得到葡萄离体茎段；

2)将葡萄离体茎段置于35-40℃的培养箱中，暗处理并同时进行热处理；

3)热处理10d后开始观察侧芽生长情况，当黄化嫩梢长至6-10cm，在无菌条件下剥取0.2-0.8mm左右的微茎尖，置于培养基中培养，直至得到繁殖材料。

2.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述培养基是添加了0.1-0.5mg/L IAA，15-30mg/L蔗糖，以及4.5-7.0mg/L琼脂或明胶，pH为5.8的改良B5培养基；其中，所述改良B5培养基包括以下组分：

KNO₃                   1250mg/L；

MgSO₄·7H₂O            125mg/L；

NaH₂PO₄·H₂O           85.4mg/L；

CaCl₂                  113.2mg/L；

(NH4)₂SO₄              67mg/L；

KI                     0.375mg/L；

H₃BO₄                  1.5mg/L；

MnSO₄·4H₂O            5mg/L；

ZnSO₄·7H₂O            1.0mg/L；

Na₂MoO₄·2H₂O          0.125mg/L；

CoCl₂·6H₂O            0.0125mg/L；

CuSO₄·5H₂O            0.0125mg/L；

Na₂-EDTA               37.3mg/L；

FeSO₄·7H₂O            27.8mg/L；

肌醇                   25mg/L；；

烟酸                   1.0mg/L；

盐酸吡哆醇             1.0mg/L；

盐酸硫铵               10mg/L。

3.如权利要求2所述的脱毒方法，其特征在于，所述培养基是添加了0.2mg/L IAA，20mg/L蔗糖，5.0mg/L琼脂或明胶，pH为5.8的改良B5培养基。

4.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述步骤1)是置于23-27℃、2000-2500lx的培养室中培养；优选置于27℃、2000lx的培养室中培养。

5.如权利要求1或4所述的脱毒方法，其特征在于，所述步骤1)中在培养室中的培养时间为5-10d，优选7d。

6.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述步骤2)是置于37-39℃的培养箱进行热处理；优选置于38℃的培养箱进行热处理。

7.如权利要求1或6所述的脱毒方法，其特征在于，所述步骤2)的暗处理如下进行：将葡萄离体茎段置于有盖箱中，然后置于培养箱中，进行处理。

8.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，步骤3)中，当黄化嫩梢长至8-9cm，在无菌条件下剥取0.5mm的微茎尖。

9.如权利要求1-8所述的脱毒方法的应用，其特征在于，用于葡萄品种及相关砧木的脱毒。

10.一种用于葡萄离体茎段脱毒的培养基，其特征在于，所述培养基是添加了0.1-0.5mg/L IAA，15-30mg/L蔗糖，以及4.5-7.0mg/L琼脂或明胶，pH为5.8的改良B5培养基；优选为添加了0.2mg/LIAA、20mg/L蔗糖，以及5.0mg/L琼脂，pH为5.8的改良B5培养基；其中，所述改良B5培养基包括以下组分：

KNO₃                   1250mg/L；

MgSO₄·7H₂O            125mg/L；

NaH₂PO₄·H₂O           85.4mg/L；

CaCl₂                  113.2mg/L；

(NH4)₂SO₄              67mg/L；

KI                     0.375mg/L；

H₃BO₄                  1.5mg/L；

MnSO₄·4H₂O            5mg/L；

ZnSO₄·7H₂O            1.0mg/L；

Na₂MoO₄·2H₂O          0.125mg/L；

CoCl₂·6H₂O            0.0125mg/L；

CuSO₄·5H₂O            0.0125mg/L；

Na₂-EDTA               37.3mg/L；

FeSO₄·7H₂O            27.8mg/L；

肌醇                   25mg/L；

烟酸                   1.0mg/L；

盐酸吡哆醇             1.0mg/L；

盐酸硫铵               10mg/L。