[发明专利]用于检测Hg2+的核酸纳米金生物传感器

权利要求书

1.一种用于检测Hg²⁺的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：包括检测试剂条、检测核酸试剂和上样缓冲液；

所述检测试纸条从左到右依次由固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；

所述玻璃纤维上涂有纳米金标记的第一核酸，其序列如SEQ ID NO.1所示，该核酸序列的5’端标记巯基并与胶体金颗粒偶联，3’端标记生物素；

所述硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；质控线上固定有第三核酸，其序列如SEQ ID NO.3所示，该核酸序列的5’端标记生物素，与链霉亲和素反应后，固定在硝酸纤维素膜的质控线上；检测线上固定有链霉亲和素；

其中，第三核酸序列与第一核酸序列特异性互补；

所述检测核酸试剂含有第二核酸，其序列如SEQ ID NO.2所示，从5’端开始第6个碱基处与第一核酸序列有T-T碱基的错配；所述检测核酸试剂与待检测溶液及上样缓冲液一起滴在所述样品垫上；

所述上样缓冲液为4X核酸杂交液，含：0.6M氯化钠，0.06M柠檬酸钠。

2.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述质控线与检测线相距3-10mm。

3.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸的相邻部分彼此重叠1-5mm。

4.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述胶体金的粒径为8-100nm。

5.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，所述的纳米金的制备方法包括：选用粒径为8-100nm的胶体金颗粒，胶体金采用常规的氯金酸煮沸还原法制备，通过控制还原剂的量在0.01％-0.05％以及搅拌速度在1000-50000转之间来控制颗粒粒径。

6.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，所述的纳米金与核酸序列的偶联与封闭老化的方法包括：将巯基修饰的第一核酸序列加入到5倍体积浓缩的纳米金溶液中，混合，在4-37℃反应10-24小时，用1％牛血清白蛋白封闭多余的活性位点，30分钟后加入NaCl和SDS使其终浓度分别至0.15M和0.01％，老化10-20小时后，10000-16000转/分钟离心20-60分钟，弃上清，即可获得所述的纳米金标记寡核苷酸探针，将此纳米金标记寡核苷酸探针沉淀用重悬液重新悬浮，4℃保存。

7.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，所述的样品垫是经过以下处理的：采用含TritonX-100、硼酸、PEG4000、BSA、蔗糖的混合液浸泡玻璃纤维4个小时后，37℃烘干过夜。