[发明专利]手足口病LAMP检测试剂盒及其检测方法无效
申请号: | 201010170608.0 | 申请日: | 2010-05-10 |
公开(公告)号: | CN102242223A | 公开(公告)日: | 2011-11-16 |
发明(设计)人: | 刘代新;刘军辉;李昂 | 申请(专利权)人: | 上海吉美生物工程有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 200092 上海市杨*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 手足 lamp 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种手足口病病原体LAMP检测试剂盒,包含以下成分
(1)病毒RNA提取试剂
病毒RNA的抽提可以采用常规的Trizol法,也可使用各生物公司生产的病毒RNA抽提试剂盒。
(2)LAMP检测反应液
①反应液Cox A16-用于检测柯萨奇病毒A16型
含有以下成分:
10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris-HCl,100mmol/L KCl,20mmol/LMgSO4,100mmol/L(NH4)SO4,1.0%Tritonx-100);100mmol/L MgSO4;25mmol/LdNTP;5mol/L betaine(甜菜碱);20umol/L引物CoxA16-FIP;20umol/L引物CoxA16-BIP;5umol/L引物CoxA16-F3;5umol/L引物CoxA16-B3;DEPC处理水。
其中引物序列为:
CoxA16-FIP:
5-AAGTRGGTTTCGGAGCCCCTTTTTTAGCCAAACCCAATGGTGAG-3
CoxA16-BIP:
5-TTYGCTTGGCARACTGCTACCATTTTAGGGGACTGACACTTGAGC-3
CoxA16-F3:5-ACATGCGCTTTGAYGCTGAA-3
CoxA16-B3:5-GCACTGGCTGGTGACATG-3
②反应液EV71-用于检测肠道病毒71型
10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris-HCl,100mmol/L KCl,20mmol/LMgSO4,100mmol/L(NH4)SO4,1.0%Tritonx-100);100mmol/LMgSO4;25mmol/LdNTP;5mol/L betaine(甜菜碱);20umol/L引物EV71-FIP;20umol/L引物EV71-BIP;5umol/L引物EV71-F3;5umol/L引物EV71-B3;DEPC处理水。
其中引物序列为:
EV71-FIP:
5-CAACTTCCCCGGTGGGTGTGTTTTCCTACATGCGCTTTGATGCA-3
EV71-BIP:
5-TATGTTTGTGCCACCTGGAGCCTTTTGGGGTTAGTGGCGGTTTG-3
EV71-F3:5-GCGCAAATGCGTAGAAAGG-3
EV71-B3:5-AGGGTCTGACAGCTTGACAA-3
③酶混合液
包括Bst DNA聚合酶(8U/ul)和AMV逆转录酶(8U/ul)
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