[发明专利]稳定的α-半乳糖苷酶水性组合物及其相关方法

权利要求书

1.一种包含具有α-半乳糖苷酶酶活性的蛋白的水性组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度大于100mM、特别是浓度为至少150mM的精氨酸。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为150mM至2M，更优选为200至400mM，最优选为250至320mM的精氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的电导率为至多40mS/cm，优选为15mS/cm至25mS/cm，更优选为18mS/cm至22mS/cm。

4.根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的pH为pH 5至pH 7.5，优选为pH 5.5至pH 7，更优选为pH 5.8至pH 6.5。

5.根据权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物来源于细菌宿主细胞，优选来源于大肠杆菌。

6.根据权利要求1至5任一项所述的组合物，其特征还在于，所述组合物的总蛋白含量为至少20mg/ml。

7.根据权利要求1至6任一项所述的组合物，其特征还在于，α-半乳糖苷酶的酶活性为0.5至0.8单位/毫克总蛋白。

8.根据权利要求1至7任一项所述的组合物，其特征在于，所述蛋白具有EC 3.2.1.22的底物特异性，优选地其中所述蛋白水解末端α-1，3-半乳糖基部分。

9.根据前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，所述的具有α-半乳糖苷酶酶活性的蛋白是天然产生的蛋白或其功能活性衍生物或片段，优选为来源于选自人、动物、植物、真菌和细菌的生物。

10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述蛋白来源于细菌生物脆弱拟杆菌，优选地其中所述蛋白是来自脆弱拟杆菌的α-半乳糖苷酶的片段，或其任何功能活性衍生物或片段，所述来自脆弱拟杆菌的α-半乳糖苷酶的片段包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。

11.一种使包含具有α-半乳糖苷酶酶活性的蛋白的水性组合物稳定的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：向所述组合物中加入精氨酸至终浓度大于100mM，特别是至少150mM。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述组合物的特征进一步如权利要求2至10任一项所限定。

13.一种制备纯化的水性组合物的方法，该组合物包含具有α-半乳糖苷酶酶活性的蛋白，所述方法包括以下步骤：

(a)提供含有所述的具有α-半乳糖苷酶酶活性的蛋白的组合物，

(b)在存在浓度大于100mM、特别是至少150mM的精氨酸时，浓缩步骤(a)的组合物，和

(c)通过阳离子交换层析纯化步骤(b)的组合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述的步骤(b)的组合物的特征进一步如权利要求2至10任一项所限定。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征还在于，所述方法在

(i)步骤(b)之前和/或之后，和/或

(ii)步骤(c)之前和/或之后，

包括一个或多个另外的纯化步骤。