[发明专利]一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法

权利要求书

1.一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(1)将巨桉无菌组培苗带有腋芽或顶芽的茎段置于装有处理液的容器中，所述处理液含有质量百分比浓度为0.1～0.5％的秋水仙素和质量百分比浓度为5～12％的助剂SD；将容器密闭后置于摇床上以80～120r/min的振荡速度，在35～40℃条件下加倍处理12～18小时；处理完毕后，使用无菌水冲洗茎段，直至完全除去秋水仙素残留液，得到经过加倍处理的茎段；

(2)将经过加倍处理的茎段接种到增殖培养基中进行培养，每隔15～20天即转接到新配制的增殖培养基中，转接3～5次后再进行生根培养；

所述增殖培养基由以下按质量体积比计的组分组成：硝酸钙537～576mg/L，硝酸钾480～520mg/L，硫酸镁355～390mg/L，磷酸二氢钾150～190mg/L，氯化钙77～116mg/L，硫酸锰20.2～24.5mg/L，硫酸锌7.7～11.6mg/L，硼酸5.4～7.2mg/L，硫酸铜0.018～0.029mg/L，钼酸钠0.19～0.38mg/L，硫酸亚铁25.3～29.4mg/L，乙二胺四乙酸二钠35.3～38.6mg/L，根皮苷2～4mg/L，盐酸硫胺素0.092～0.112mg/L，盐酸吡哆辛0.41～0.58mg/L，烟酸0.39～0.61mg/L，甘氨酸1.5～2.4mg/L，肌醇91～112mg/L，核黄素5.0～7.0mg/L，激动素0.4～0.6mg/L，萘乙酸0.15～0.25mg/L，琼脂6100～6800mg/L和蔗糖30000～45000mg/L，余量为蒸馏水；

所述步骤(1)和步骤(2)是在无菌条件下进行操作。

2.根据权利要求1所述的一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于：步骤(1)所述茎段的长度为0.7～1.3cm。

3.根据权利要求1所述的一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于：步骤(1)所述处理液的用量为每100mL处理液处理20～30枚茎段。

4.根据权利要求3所述的一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于：所述增殖培养基由以下按质量体积比计的组分组成：硝酸钙556mg/L，硝酸钾500mg/L，硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，氯化钙96mg/L、硫酸锰22.5mg/L、硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸铜0.025mg/L，钼酸钠0.25mg/L，硫酸亚铁27.3mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，根皮苷2.5mg/L，盐酸硫胺素0.10mg/L，盐酸吡哆辛0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L，肌醇100mg/L，核黄素6.0mg/L，激动素0.5mg/L，萘乙酸0.2mg/L，琼脂6800mg/L和蔗糖45000mg/L，余量为蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于：步骤(2)所述生根培养采用的培养基由以下按质量体积比计的组分组成：硝酸钾614～654mg/L，硝酸铵530～570mg/L，磷酸二氢钾47～67mg/L，硫酸镁113～133mg/L，氯化钙137～157mg/L，碘化钾0.8～0.9mg/L，硼酸5.2～7.2mg/L，硫酸锰20.3～24.5mg/L，硫酸锌7.6～9.4mg/L，钼酸钠0.2～0.3mg/L，硫酸铜0.02～0.03mg/L，氯化钴0.02～0.03mg/L，乙二胺四乙酸二钠34.3～40.3mg/L，硫酸亚铁25.8～29.8mg/L，肌醇90～110mg/L，甘氨酸1.6～2.6mg/L，盐酸硫胺素0.08～0.12mg/L，盐酸吡哆醇0.4～0.6mg/L，烟酸0.4～0.6mg/L，吲哚丁酸0.42～0.62mg/L，ABT生根粉0.39～0.69mg/L，蔗糖25000～40000mg/L和琼脂6100～6800mg/L，余量为蒸馏水。

6.根据权利要求1所述的一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法，其特征在于：步骤(1)所述巨桉为审定品种Eg5无性系。