[发明专利]一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法

说明书

技术领域

本发明属于林业生物技术育种领域或植物细胞工程领域，特别涉及提出了一种建立巨桉无性系Eg5多倍体诱导及培育体系的方法。

背景技术

巨桉(Eucalyptus grandis)是桉属双蒴盖亚属横脉组柳桉系中的高大乔木，原分布于澳大利亚东海岸。它生长迅速，造林后10年内树高年生长量可达2-3m，干形通直，圆满，可广泛用于造纸、建筑、人造板和薪炭林等用途。因此，它是速生丰产林的最常用的树种之一，也是栽培面积最大的桉树种之一。巨桉现已广泛种植于我国南方的福建、四川、云南、湘南、赣南和两广北部亚热带地区。

巨桉Eg5(良种编号：闽S-SC-EG-005-2007)是福建永安林业集团选育的巨桉优良无性系，已通过福建省林木品种审定委员会审定，由福建省林业厅予以公告，并受到良种保护法规的保护。

经过倍性育种育成的多倍体植物一般具有以下2个典型特征：1)器官的“巨大性”，如植物茎杆、叶片、花、果实、细胞、气孔等均较大，因此，可以提高作物产量；2)抗逆性增强，如增强作物的抗病、抗旱、抗寒性，使作物适应性变广。因此，多倍体育种在农林业生产中有非常积极的意义。

桉树是一种外来物种，并且，根据胡洲鹤的研究结果，使用简单的秋水仙素处理后染色体只在原有的22条的基础上增加了3～5条，并没有实现加倍。使用谭德冠在刚果12号桉上的诱导方法，用不同浓度的秋水仙素(其中添加了渗透剂二甲基亚砜)来诱导巨桉芽的多倍体，只得到20％～30％的诱导率，诱导率过低。

发明内容

为了弥补现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法；该方法使诱导率达到60％以上。并且，针对在秋水仙素处理后茎段出现的玻璃化现象，设计了专用的培养基，能有效抑制玻璃化现象的出现，获得了健壮的大田移栽生根苗。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种建立巨桉四倍体植株的诱导及培育体系的方法。该方法包括以下操作步骤：

(1)将巨桉无菌组培苗带有腋芽或顶芽的茎段置于装有处理液的容器中，所述处理液含有质量百分比浓度为0.1～0.5％的秋水仙素和质量百分比浓度为5～12％的助剂SD；将容器密闭后置于摇床上以80～120r/min的振荡速度，在35～40℃条件下加倍处理12～18小时；处理完毕后，使用无菌水冲洗茎段，直至完全除去秋水仙素残留液，得到经过加倍处理的茎段；

(2)将经过加倍处理的茎段接种到专用增殖培养基中进行培养，每隔15～20天即转接到新配制的增殖培养基中，转接3～5次后再进行生根培养；