[发明专利]水稻纹枯病生防菌枯草芽孢杆菌WJ-1及菌剂与应用

说明书

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，具体涉及一种用于水稻纹枯病生物防治的细菌的分离鉴定、含有该菌的菌剂或其发酵产物及对水稻纹枯病的防治。

背景技术

水稻纹枯病在世界各稻区均有发生，在我国主要在华南和长江流域的稻区重发生较为严重，二十世纪80年代在水稻种植区大面积暴发，发展成为我国水稻上的一种主要病害；二十世纪90年代以后，该病的发生为害更为猖撅，南方稻区的发病面积比例普遍超过50％以上，成为我国水稻生产的主要障碍，发病面积以及危害损失居水稻病害首位(廖皓年等，1997；孟庆忠等，2001)。根据全国农业技术推广服务中心的统计，2005年水稻纹枯病发生面积达2.48亿亩，稻米产量损失达到109万吨，占我国主要农作物由于病害而损失量的7.6％。

水稻纹枯病由半知菌亚门、丝孢纲、无孢目、丝核菌属的茄丝核菌(Rhizoctonia solaniKühn)引致，是一种顽固的土传病害。由于缺乏抗水稻纹枯菌的抗病品种，目前应用化学杀菌剂仍然是防治水稻纹枯病的有效手段。井冈霉素和艾米是农业生产上的主要农药品种，井冈霉素对环境污染较小，但是由于近30多年的持续使用，在田间已经发现了抗井冈霉素的野生菌株(胡秀荣等，2006；许文耀等，2007)，艾米的大量施用对环境造成了严重的污染，同时也加大了纹枯菌抗药突变的几率。因此寻找新的、安全有效的措施来防治水稻纹枯病十分必要。

利用生防菌防治植物病害在国内外均有相关报道，迄今美国已经有四种枯草芽孢杆菌的生防制剂拿到了生产许可证；日本东京技术研究所的Bacillus subtilis RB14和NB22对茄科植物的病害有很好的防治效果；经检索，申请者在现有的专利和非专利文献中检索到一些关于枯草芽孢杆菌的文献报道和专利。例如专利申请号为03121110.0公开了“一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(BAY-1)及技术使用方法”，利用枯草芽孢杆菌H728防治番茄灰霉病。专利申请号为98124889.6公开了“一种枯草芽孢杆菌菌株、制法、制剂及应用”，利用源于苹果果实表面的枯草芽孢杆菌XM16，防治苹果霉心病和枝干病害。专利申请号为200610200365.4公开了“一株枯草芽孢杆菌菌株及其应用”，利用枯草芽孢杆菌M22BH3进行桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、苹果褐腐病菌等植物病原真菌的生物防治。申请号为200410022543公开了一种利用枯草芽孢杆菌Xi-55菌株防治稻瘟病。在所有已申请的专利文献中均没有涉及本发明主题的专利文献报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，分离筛选一株对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)引起的水稻纹枯病具有显著生物防治效果的细菌菌株；将其制备为生防菌剂，用来防治大田水稻纹枯病。以此消弱化学药剂对环境的破坏以及人类身体健康的影响，同时延缓水稻纹枯菌抗药性菌株的出现，以实现农业、人类和环境的和谐、可持续发展。

本发明通过以下技术方案实现：

本发明从湖北省武汉市武昌狮子山地区华中农业大学校园的菜园土中分离筛选获得一株适用于水稻纹枯病防治的生防细菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WJ-1，该菌株于2010年3月30日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(英文简称CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO：M2010069。

申请人利用发酵方法制备了一种对水稻纹枯病具有防治作用的微生物菌剂，其步骤如下：

(1)先将保藏号为CCTCC NO：M2010069的枯草芽孢杆菌WJ-1的菌株在PDA平板上于33℃活化1d，再将单菌落接种到含有200ml PDB的三角瓶中，于180r/min下，33℃振荡培养48h，得到浓度为1.5×10¹⁰cfu/ml的枯草芽孢杆菌WJ-1的发酵菌液A；

(2)将所述的发酵菌液A于4℃，6,000r/min下离心20min，取离心后的上清液，用孔径为0.22μm的细菌过滤器过滤所述的上清液，得到不含枯草芽孢杆菌WJ-1的发酵液B，将获得的沉淀菌体备用；

(3)将沉淀菌体用无菌水洗涤3次，再用无菌水悬浮，使枯草芽孢杆菌WJ-1的浓度达到1.5×10¹⁰cfu/ml，得菌液C；