[发明专利]一种敲除分枝杆菌ksdD基因的方法及其应用无效
| 申请号： | 201010176347.3 | 申请日： | 2010-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN101864441A | 公开（公告）日： | 2010-10-20 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;韩冷;田灵芝;夏海锋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N1/21;C12R1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分枝杆菌 ksdd 基因 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.构建了分枝杆菌ksdD基因敲除载体T-ksdD::Km，其特征是以能够转化甾醇产生AD(D)的分枝杆菌染色体为模板PCR扩增出ksdD基因，连接PMD18-T载体后获得T-ksdD质粒，将以PET28a质粒为模板扩增出的卡那抗性基因Km插入ksdD基因中问获得基因敲除质粒T-ksdD::Km。
2.根据权利要求1中构建的重组敲除质粒T-ksdD::Km利用电转化方法转化分枝杆菌。分枝杆菌细胞壁含有大量的脂类，影响电转化效率，所以需在培养基中添加一定量氨苄青霉素以抑制细胞壁的生长。其特征是需用10％甘油将菌体洗两次，8000r/min离心，最后将菌体重悬于200μL 10％甘油中。电转化条件分别为，电压2.0KV，电转化时间5ms。以15μg/mL卡那霉素抗性平板筛选阳性转化子。
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