[发明专利]一种利用鱿鱼肝脏蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的方法

权利要求书

1.一种利用鱿鱼肝脏蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)采取丙酮浸提法提取鱿鱼肝脏蛋白：将鱿鱼肝脏与水按质量比1∶1～1∶1.5混合，充入氮气10～20分钟，加入占鱿鱼肝脏重量0.1～0.5％的L-抗坏血酸-6-棕榈酸酯抗氧剂，放入高压锅中处理20～30min，离心处理，除去上层鱼油，用丙酮洗涤数次，将组织脱水制成丙酮粉，真空干燥即得脱脂鱿鱼肝脏蛋白；

2)用胃蛋白酶酶解鱿鱼肝脏蛋白：以脱脂鱿鱼肝脏蛋白为底物，在水解温度35～38℃，pH为1.5-2.5，酶与底物的比为2～3％，底物浓度为1～3％条件下水解鱿鱼肝脏蛋白18～25h，其中百分比为质量百分比；

3)将得到的鱿鱼肝脏蛋白酶解液进行超滤处理；

4)将超滤后的产物用Sephadex G-50凝胶柱初步分离，得到粗分物的ACE抑制肽；

5)在粗分物的ACE抑制肽中选取活性高的组分用DEAE阴离子交换柱进行分离纯化；

6)将纯化后得到的活性高的组分用Sephadex LH-20继续分离纯化；

7)最后检测纯度，得到血管紧张素转换酶抑制肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1中离心处理工艺为4000～10000rpm/min处理20～40min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤3的超滤处理的过程为：

1)采用超滤装置将鱿鱼肝脏蛋白酶解液进行超滤，滤膜为截留分子量1kDa～30kDa。

2)将截留液用蒸馏水稀释后继续超滤，合并收集的超滤液并进行冷冻干燥。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤4的凝胶柱初步分离的工艺为：用蒸馏水进行洗脱，流速为20～40mL/h，并测定各肽峰抑制ACE的活性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的凝胶柱中凝胶采用葡萄糖凝胶，分离的分子量为1kDa～10kDa。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤5的分离纯化具体过程为：选取活性高的组分上样先用水洗脱，再用0～1mol/L NaCl溶液进行线性洗脱，流速为20～28mL/h，并测定各肽峰抑制ACE的活性。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤6的分离纯化工艺条件为：洗脱液为25～35％(wt)的甲醇溶液，流速为20～28mL/h，并测定各肽峰抑制ACE的活性。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤7的检测纯度是采用反相高效液相色谱C18柱检测纯度，洗脱液甲为含0.01％～0.03％TFA的水，洗脱液乙为含0.01％～0.03％TFA的乙腈溶液，先用5％～10％的甲液洗脱，再用洗脱梯度为95％～98％乙液洗脱，流速为20～24mL/h，采用体积浓度。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述高压锅采用115～125℃。