[发明专利]一种利用鱿鱼肝脏蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及鱿鱼肝脏蛋白深加工的方法，尤其涉及一种利用鱿鱼肝脏蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的方法。

背景技术

鱿鱼加工过程中有约占鱿鱼体重30％的头、足、肝脏及表皮等废弃物产生。对于这些废弃物，一般的处理方法是加工鱼粉，或者掩埋，这不但是对渔业资源的巨大浪费，而且还存在着环境污染的问题。在国外，如西班牙和日本对于鱿鱼肝脏的利用采用自身酶解发酵法生产鱿溶浆、鱿鱼粉等作为鱼类饲料。在国内鱿鱼肝脏的利用和研究还有比较大的发展空间，目前仅有鱿鱼肝脏干粉的加工，并且是用作饲料，技术水平不高。目前，有从鱿鱼皮制备胶原蛋白活性肽，如专利号为200710013140.2，一种鱿鱼皮胶原蛋白活性肽的制备，将鱿鱼皮用清水洗净，加入NaOH的水溶液浸泡，再用清水反复洗涤至pH中性；加入稀酸水溶液浸泡，再洗涤至pH中性；搅拌下，在热水中抽提胶原蛋白，过滤除去不溶物；在搅拌下，加酶酶解1-6h，酶解温度为40-50℃，在90-100℃下灭酶4-10min；用碱液调pH至中性，酶解液经过滤后，再依次经过截留分子量为8KD的超滤膜超滤、纳滤脱盐，最后真空浓缩，喷雾干燥。产品具有很强的生物活性，可用于制备抗氧化、降血压、抗动脉粥样硬化或美容的保健食品或药品。但是它是从鱿鱼皮来制取。本研究的目的就是从废弃的鱿鱼肝脏中提取蛋白质和生物活性肽，以使宝贵的蛋白质和油脂资源得以综合利用，提高附加值，减少废弃物的排放，净化环境。

鱿鱼肝脏中提取生物活性肽的研究，可提供消化吸收效率更高的蛋白质水解产物，用于食品和饲料行业，而且制备的生物活性肽还可应用于疾病的防治，能为维护人类的健康作贡献。

目前，有许多不同种类的药物应用于高血压的治疗，其中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽(即降血压活性肽)是一种治疗高血压的主要药物。从1981年第一个口服有效的人工合成ACE抑制剂卡托普利(Captopril)批准使用以来，现在应用于临床上的ACE抑制剂已达18种，但人工合成的ACE抑制剂在临床应用过程中往往会产生副作用，如咳嗽、味觉功能紊乱及皮疹等。因此，寻找天然的ACE抑制剂引起了研究者的极大兴趣。试验表明，天然的ACE抑制肽对自发性高血压大鼠(SHR)及高血压患者具有降压作用，而对正常血压大鼠及人无降压作用。另外，这些肽是经食品级酶在混合条件下处理获得的，其安全性高。ACE抑制肽在开发具有降血压功能的功能食品中具有广阔前景。

目前生产ACE抑制肽的方法大体有三种：一是提取存在于生物体中的各类天然ACE抑制肽；二是通过化学法或酶法水解蛋白质，化学法常采用加热和酸处理的方法，而体外蛋白酶水解包括直接酶解和利用微生物间接酶解两类；三是用重组DNA技术、酶法、化学法合成活性肽。其中，酶解蛋白质生产ACE抑制肽因其安全性高、能在温和的条件下进行定位水解分裂产生特定的肽段，而且水解过程易受控制，价廉易推广，引起人们的极大兴趣。因而近几年报道的ACE抑制肽的制备方法皆为酶解法，酶的选择是酶解法生产活性肽的关键，应根据酶的专一性从众多的蛋白酶中筛选出能水解所需肽段，目前广泛使用的蛋白酶有木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等。

由于ACE抑制肽的氨基酸组成和结构差别均较大，没有一个固定或较特殊的氨基酸组成，并且蛋白酶解产物成分相当复杂，这就增加了它的分离提取难度。因此，建立一套适宜的分离提取技术工艺是将ACE抑制肽推向商业化生产的必要条件。ACE抑制肽的分离提取甚至结构鉴定是一项最复杂，也是最有意义的工作。所用的分离纯化的方法主要有：离子交换树脂、超滤、凝胶过滤色谱、高效液相色谱、聚丙稀酰胺凝较电泳等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是根据上述技术现状提供一种从废弃的鱿鱼肝脏中提取蛋白质进而制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的方法，提取分离工艺合理，易控制易操作，制得的活性肽具有较高的活性。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种利用鱿鱼肝脏蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)采取丙酮浸提法提取鱿鱼肝脏蛋白：将鱿鱼肝脏与水按质量比1∶1～1∶1.5混合，充入氮气10～20分钟，加入占鱿鱼肝脏重量0.1～0.5％的L-抗坏血酸-6-棕榈酸酯抗氧剂，放入高压锅中处理20～30min，离心处理，除去上层鱼油，用丙酮洗涤数次，将组织脱水制成丙酮粉，真空干燥即得脱脂鱿鱼肝脏蛋白；