[发明专利]Delta1转导的OP9细胞共培养体系的方法无效
| 申请号： | 201010178255.9 | 申请日： | 2010-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN102250834A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 黄家学;侯士芳;王雪莲;张宇光;孟恒星;陈晓波 | 申请（专利权）人： | 协和干细胞基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/0775;C12N5/0789 |
| 代理公司： | 天津才智专利商标代理有限公司 12108 | 代理人： | 王晓红 |
| 地址： | 300384 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | delta1 转导 op9 细胞 培养 体系 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种Delta1转导的OP9细胞共培养体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)OP9-DL1细胞失去支持HSCs发育成为B细胞的能力；(2)OP9-DL1获得诱导HSCs发育成为T细胞的正常的程序。
2.根据权利要求1所述的Delta1转导的OP9细胞共培养体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：OP9-载体和小鼠Delta-like 1转导OP9细胞基质细胞系保存在添加了20％牛血清的改良培养基中；干细胞因子Flt3-L和IL-7的浓度依照R&D使用说明添加，祖细胞接种到平板的前一天，每个孔板中的基质细胞数要达到2×104；将祖细胞以不同的密度添加到不同孔板的基质细胞，确定产生最佳淋巴细胞的祖细胞添加浓度；培养一周后，用0.53m M EDTA/PBS，pH7.4来收集基质细胞和造血细胞，然后，3000-10000的造血细胞与基质细胞共同转接到新鲜的基质细胞进行传代培养；经过几周的分化观察后，用基质细胞通过VCAM-1抗体染色的方法被去除，而死亡细胞则通过7-aminoactinomycinD染色被去除，当造血细胞的得率达到95％，此培养条件和细胞密度可取。
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