[发明专利]11α羟基坎利酮的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种11α羟基坎利酮的合成方法，属于生物化学领域。

背景技术

由于依普利酮的化合物专利已过期，近年来全世界制药行业纷纷对该产品进行仿制，目前已有阿根廷等几个非规范市场获得批准，我国也有四家企业申请注册。对依普利酮的所有合成路线分析发现，虽然依普利酮有多条合成路线，但几乎所有路线都离不开一个关键中间体即11α羟基坎利酮。目前由于11α羟基坎利酮成本高，导致依普利酮价格昂贵。鉴于上述情况，对依普利酮的关键中间体11α羟基坎利酮生物合成进行研究，并使其成本有较大幅度下降，满足依普利酮产业化的需要是极其有前景的。由于11α羟基坎利酮成本决定了依普利酮的产品成本，研究对依普利酮的推广也有着决定性意义。

通过相关资料的检索，目前国内外对11α羟基坎利酮的合成主要有以下几种方法：

第一种方法：以表氢化可的松作为起始原料合成，路线如下：

表氢化可的松             11α羟基双酮              11α羟基坎利酮

第二种方法：以双酮为起始原料进行11α羟化后再合成，路线如下：

双酮                     11α羟基双酮                 11α羟基坎利酮

第三种方法：以坎利酮为起始原料进行11α羟化即得，路线如下：

坎利酮                           11α羟基坎利酮

上述三种方法，第一种方法主要存在合成路线长，污染大，收率低，成本高，降低成本的空间较少等缺点；第二种方法既需要生物技术又有较长的合成路线，存在生物转化酶专一性差，投料浓度低，同时还存在污染大，降低成本的空间有限等缺点；相比上述二种方法，第三种方法的优势非常明显，主要表现在用生物技术一步即得产品，具有线路短，污染少等优点，但同时也存在常用转化酶(像黒根酶、梨头酶、绿僵酶等)对坎利酮专一性差(50％)左右、投料浓度低(0.3％左右)、收率低(30％左右)等缺点，相比前二种方法，第三种方法降低成本的潜力是巨大的。

发明内容：

本发明所解决的技术问题是提供一种11α羟基坎利酮的合成方法，更具体地，是解决上述第三种合成方法的转化酶对坎利酮专一性差、投料浓度低和收率低的问题。

本发明的技术方案：一种11α羟基坎利酮的合成方法，将原料坎利酮加入至培养基，投入赭曲霉菌种发酵，再从菌丝体提取，精制得到11α羟基坎利酮；所述的赭曲霉菌种采用下述步骤得到：

1)、赭曲霉原菌种经紫外线波长为200～280nm，照射10～30分钟后培养出突变优异菌种；

2)、将步骤(1)得到的赭曲霉菌种加入传代固体培养基，培养基配比：0.05～0.15％蛋白胨、1～3％麦芽糖、1～3％葡萄糖、1.5～2.5％琼脂，调节pH在4.8～6，并在条件为：25～30℃，培养7～10天，经三代传代得到三代赭曲霉菌种，5℃以下低温冷冻储存；

3)、配置液体培养基，其配比为：葡萄糖0.5～1.5％，蛋白胨0.5～1.5％，酵母浸膏0.5～1.5％，玉米浆0.5～1.5％，调节pH在5.5～6.1，并灭菌，按5～10％的接种量接种上述三代赭曲霉菌种，培养温度控制在25～32℃下，转速为100～200r/min，pH控制在5～6之间，培养时间20～30小时。

优选地，本发明的合成方法包括下述步骤：

1)、将配比为：坎利酮0.8％、丙二醇2％、吐温80  1％，加热溶解作为底物，投了已培养好的菌种培养基中发酵；所述的发酵温度控制在29.5～30.5℃，转速为150r/min，pH控制在6～7之间，培养48～72小时，测转化率超过85％后加热灭菌；

2)、将上述发酵后的培养液，经过离心机菌液分离，获得的菌丝体加入2.5％的二氯甲烷萃取3-4次，弃菌丝体残渣；蒸馏回收溶剂二氯甲烷后，加入0.5％甲苯，冷却结晶精制，得到11α-羟基坎利酮。

优选地，本发明所述的赭曲霉菌种采用下述步骤得到：

1)、赭曲霉原菌种经紫外线波长为254nm照射15分钟后，培养出突变优异菌种；

2)、将步骤(1)得到的赭曲霉菌种加入传代固体培养基，培养基配比：1％蛋白胨、2％麦芽糖、2％葡萄糖、2％琼脂，调节pH至5.3，并在条件为：25～30℃，培养7～10天，经三代传代得到三代赭曲霉菌种，5℃以下低温冷冻储存；