[发明专利]梅毒特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条及其制备方法

权利要求书

1.梅毒特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条，其特征在于设有第1试剂条 和第2试剂条；

第1试剂条设有第1载体板、第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜、梅毒特异 性IgM抗体检测线、第1对照线和第1吸收垫；第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维 膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面，第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端 上，第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上，第1吸收垫的一端设在第1硝酸 纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgM抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上； 在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在第1对照线处 包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体；

第2试剂条设有第2载体板、第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜、特异性总 抗体检测线、第2对照线和第2吸收垫；第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和第 2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面，第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上，第2 胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上，第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维膜的 另一端上，特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上；在特异性总抗体 检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47，在 第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体。

2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条，其特征 在于第1试剂条的第1加样垫与第2试剂条的第2加样垫之间用玻璃纤维膜连接。

3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条，其特征 在于所述第1载体板和第2载体板为PVC板。

4.如权利要求1所述的梅毒特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的制备方 法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备梅毒重组抗原TPN17、TPN47

采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达， 得梅毒重组抗原TPN17和TPN47；

2)硝酸纤维素膜的点样

在梅毒特异性IgM抗体检测线上包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在特异性总 抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47， 晾干；

所述抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47的浓度为 1～4mg/mL；

抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体的浓度为1～4mg/mL；

羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体由抗TPN17-IgG抗体与抗TpN47-IgG抗体按 体积比1∶1混合，其终浓度为1～4mg/mL；三者点样量为1μL/cm；

3)制备胶体金

采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取1％氯金酸1mL加入到100mL去离子双 蒸水中，得到的氯金酸浓度为0.01％，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热搅拌 下加入1％柠檬酸三钠水溶液2.0mL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于棕色瓶 中4℃冰箱保存备用；

4)胶体金与TPN17、TPN47的标记

胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记：取胶体金10m L，用0.1mol/L NaOH调至pH5.4， 加100μg TPN17，混匀，放置5min，加入5％BSA 1m L混匀，4℃、10000r/min离心1h，弃上 清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10m L，4℃、10000r/min离心1h，弃上清，沉淀用TBS稀释 至1mL，得胶体金标记的TPN17抗原；

胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；

将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均匀地涂于玻璃纤维 膜上，烘干，制备成胶体金垫；

所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合，是胶体金标记的 TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1∶0.2～5混合；

5)制备免疫层析检测条

第1试剂条设有第1载体板、第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维膜、梅毒特异 性IgM抗体检测线、第1对照线和第1吸收垫；第1加样垫、第1胶体金垫、第1硝酸纤维 膜和第1吸收垫依次粘贴在第1载体板上表面，第1加样垫的一端设在第1胶体金垫的一端 上，第1胶体金垫的另一端设在第1硝酸纤维膜的一端上，第1吸收垫的一端设在第1硝酸 纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgM抗体检测线和第1对照线依次设在第1硝酸纤维膜上； 在梅毒特异性IgM抗体检测线处包被抗人IgM特异性片段μ链单克隆抗体，在第1对照线处 包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgM抗 体与特异性总抗体联合检测试剂条的第1试剂条；

将第2试剂条设有第2载体板、第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜、特异性 总抗体检测线、第2对照线和第2吸收垫；第2加样垫、第2胶体金垫、第2硝酸纤维膜和 第2吸收垫依次粘贴在第2载体板上表面，第2加样垫的一端设在第2胶体金垫的一端上， 第2胶体金垫的另一端设在第2硝酸纤维膜的一端上，第2吸收垫的一端设在第2硝酸纤维 膜的另一端上，特异性总抗体检测线和第2对照线依次设在第2硝酸纤维膜上；在特异性总 抗体检测线处包被抗人Ig单克隆抗体或梅毒特异性抗原TPN17和/或梅毒特异性抗原TPN47， 在第2对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒 特异性IgM抗体与特异性总抗体联合检测试剂条的第2试剂条。