[发明专利]抗轮状病毒药物作用靶标及其构建方法和应用方法

权利要求书

1.抗轮状病毒药物作用靶标，其特征在于：为轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A相互作用的复合物三维结构模型，所述轮状病毒VP6蛋白的氨基酸序列如SEQ No.1所示，与人亲环素A相互作用的功能区域为第52至第100位和第343至第392位氨基酸，其中活性位点包括Asn 53、Ala 348、Val 349、Ile 355和Pro 363；所述人亲环素A的氨基酸序列如SEQ No.2所示，与轮状病毒VP6蛋白相互作用的功能区域为第54至第150位氨基酸，其中活性位点包括Arg 55、Gln 63、Lys 125和Arg 148。

2.权利要求1所述抗轮状病毒药物作用靶标的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

a、用蛋白组学方法对轮状病毒感染细胞进行全细胞表达谱分析，发现轮状病毒感染可诱导人亲环素A表达升高；

b、用生物信息学方法对轮状病毒蛋白质与人亲环素A的相互作用进行网络分析，揭示轮状病毒VP6蛋白和人亲环素A有相互作用；

c、用同源蛋白模建方法构建轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A相互作用的复合物三维结构模型，确定轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A相互作用的功能区域和活性位点；

d、用分子生物学方法验证轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A的相互作用，证明轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A确实存在相互作用；

e、针对轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A相互作用的功能区域和活性位点，用计算机虚拟筛选方法搜寻活性化合物，并对所得活性化合物进行病毒水平的测试，确证抗轮状病毒药物作用靶标的建立。

3.应用权利要求1所述抗轮状病毒药物作用靶标筛选抗轮状病毒药物的方法，包括以下步骤：

a、针对抗轮状病毒药物作用靶标中轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A相互作用的功能区域和活性位点，检测候选化合物与轮状病毒VP6蛋白的功能区域和活性位点的结合常数，或者检测候选化合物与人亲环素A的功能区域和活性位点的结合常数，筛选出具有较强亲和力的化合物；

b、检测步骤a所得化合物抑制轮状病毒VP6蛋白与人亲环素A结合的能力，筛选出具有较强抑制能力的化合物；

c、检测步骤b所得化合物对轮状病毒感染细胞的保护作用。