[发明专利]一种水泡性口炎病毒抗体胶体金检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种水泡性口炎病毒抗体检测试纸条，由样品垫、金标垫、吸收垫、硝酸纤维素膜组成，其特征在于：金标垫包被有纯化的VSV-G基因胶体金偶联标记物，检测线包被有纯化的VSV抗原，质控线包被有兔抗水泡性口炎病毒抗体，质控线侧贴有吸收垫。

2.权利要求1所述水泡性口炎病毒抗体检测试纸条的制备方法，包括下述步骤：

(1)VSV的增殖和纯化：将VSV病毒接种长满单层的BHK-21细胞，细胞达80％时，收获细胞培养病毒液，反复冻融2次后，用差速离心及不连续蔗糖密度梯度离心纯化病毒；

(2)VSV多克隆抗体的制备：将纯化的VSV分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂等比例混合乳化后作为免疫原，免疫家兔，待抗体效价达到10⁵时，用非乳化抗原加强免疫一次3d后兔颈静脉放血分离血清；应用A-Sepharose亲和层析法纯化血清IgG，-20℃保存备用；

(3)VSV-G蛋白的原核表达与纯化：提取纯化VSV的RNA，扩增VSV-G蛋白基因片段，构建重组表达质粒pGEX-G，并在大肠杆菌中诱导表达，利用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化表达的蛋白；

(4)胶体金溶液及金标蛋白的制备：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，确定胶体金与VSV-G蛋白用量比例，制备金标VSV-G蛋白偶联标记物，采用低温超速离心法纯化金标VSV-G蛋白；

(5)试纸条的组装：将金标VSV-G蛋白用喷点仪喷点玻璃纤维素膜，纯化的VSV和VSV高免血清IgG分别喷涂于硝酸纤维膜检测线和质控线上，将处理好的硝酸纤维膜、玻璃纤维膜、样品垫、吸水垫等材料按顺序进行粘贴、组装、切条、密封，4℃保存。