[发明专利]环介导等温扩增检测人巨细胞病毒的方法、检测用试剂盒和引物组

说明书

技术领域

本发明涉及基于环介导等温扩增(LAMP)技术检测人巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus，HCMV)的快速检测技术。具体涉及有效用于HCMV特定基因片段的核酸扩增的引物与引物组，涉及LAMP方法所用的生物试剂。

背景技术

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)的感染极其普遍，40％的普通人群中可以检出HCMV抗体。6岁以上人群58.9％感染HCMV，80岁以上人群90.8％感染HCMV。尽管HCMV多呈隐性感染，但在免疫功能受限或低下人群中可致病，比如在新生儿、HIV感染者、器官移植患者、恶性肿瘤患者等特定人群中。HCMV在孕妇中发生垂直传播，是新生儿缺陷的首要病因。HCMV对胎儿/新生儿可引起先天性或围产期感染。HCMV在免疫正常人群中引起单核细胞增多症。输血后获得性CMV感染的表现类同单核细胞增多症。HCMV在免疫受损人群中引起CMV肺炎、胃肠道疾病与视网膜炎。

既往检测HCMV的方法中，传统技术包括细胞培养、载玻片培养法、以及较酶联免疫吸附法(ELISA法)更为特异的PP65抗原血症试验。

分子诊断技术包括聚合酶链式反应法(PCR法)、杂交捕获技术、NASBA以及分枝DNA方法等。

分子诊断技术较传统细胞学与血清学方法灵敏、特异，但需要昂贵的热循环仪或化学发光检测系统。目前尚未见等温扩增方法检测HCMV以及检测用试剂盒、引物组的报道。

发明内容

本发明要解决目前检测人巨细胞病毒周转时间长，需要使用特殊设备、费用高等问题，为此提供本发明的环介导等温扩增检测人巨细胞病毒的方法、检测用试剂盒和引物组。

本发明的技术方案包括检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组、一种人巨细胞病毒的检测方法和HCMV基因检测用试剂盒。

本发明检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组，其特殊之处在于包含扩增人巨细胞病毒基因UL122特异碱基序列的正向内引物FIP、正向外引物F3、反向内引物BIP、反向外引物B3，以及第一环引物LF和/或第二环引物LB：

UL122-F3：CCGATCCTCTGAGAGTCTGC

UL122-B3：AGTGTCCTCCCGCTCCTC

UL122-FIP：GGGTGACACCAGAGAATCAGACCTAGTGTGGATGACCTACGG

UL122-BIP：CCGCGACTATCCCTCTGTCCT CCTCTTCCTCATCACTCTGC

UL122-LF：AGGCTACAATAGCCTCTTCCTC

UL122-LB：CTGAGAACAGTGATCAGGAAGAAA

所述引物与基因UL122的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链互补。

本发明检测人巨细胞病毒的LAMP扩增用特异核酸引物组，其特殊之处还在于包含扩增人巨细胞病毒基因US14特异碱基序列的正向内引物FIP、正向外引物F3、反向内引物BIP、反向外引物B3，以及第一环引物LF和/或第二环引物LB：

US14-F3：TGTGATAGATTAGTGTTTCG

US14-B3：ACCTCCACACTTTTGAC

US14-FIP：GCTACATCGCCACCAAAAT-GTGGCGTAAAGTATCAGC

US14-BIP：GCACGTCTTGGAAAAGGAC-CTTCTACTTACACCTGGTTAC

US14-LF：ACGTCATCCGCAGCT

US14-LB：AGAGACACAGCAAAGTCT

所述引物与基因US14的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链互补。

本发明一种人巨细胞病毒的检测方法，其特殊之处在于：

(Ⅰ)以人巨细胞病毒的UL122基因库登陆号：BK000394基因序列的172077-172342bP位的核酸序列的一部分或其互补链为靶，通过LAMP法用权利要求1所述的引物选择性扩增所述靶区域，确认是否存在扩增产物。

(Ⅱ)以人巨细胞病毒的US14基因库登陆号：BK000394基因序列的203423-203633 bP位的核酸序列的一部分或其互补链为靶，通过LAMP法用权利要求2所述的引物选择性扩增所述靶区域，确认是否存在扩增产物。