[发明专利]用真核表达系统制备泛素结合酶UbcH10的方法无效
| 申请号： | 201010184842.9 | 申请日： | 2010-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN101864426A | 公开（公告）日： | 2010-10-20 |
| 发明（设计）人： | 陈世敏;刘贤锡 | 申请（专利权）人： | 陈世敏 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C07K14/47 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张贵宾 |
| 地址： | 250031 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用真核 表达 系统 制备 结合 ubch10 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用真核表达系统制备泛素结合酶UbcH10的方法，其特征在于：
主要包括如下步骤：
(1)从大肠癌组织中提取基因组总RNA，以此为模板通过RT-PCR扩增泛素结合酶UbcH10，并将其构建至克隆载体pMD18-T中；
(2)通过EcoR I和HindI II双酶切构建成重组表达载体pcDNA3.1-UbcH10；
(3)重组质粒经酶切和序列测定后，转染大肠癌细胞株LoVo，进行Western-blot分析检测；
(4)经Western-blot分析表明构建的重组表达载体pcDNA3.1-UbcH10能在真核表达细胞中高表达UbcH10蛋白。
2.根据权利要求1所述的用真核表达系统制备泛素结合酶UbcH10的方法，其特征在于：所述UbcH10基因序列的特异性引物中，上游引物序列为5’-GGAATTCAATGCTTCCCAAAACCGCG-3’，含EcoR I位点和起始密码子ATG；下游引物序列为5’-CCCAAGCTTATCAGGGCTCCTGGCTGGT-3’，含HindI II位点和双终止密码子TAA、TGA。
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