[发明专利]用毕赤酵母pGAP调控表达L-阿拉伯糖异构酶的方法无效
| 申请号： | 201010184847.1 | 申请日： | 2010-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN101831418A | 公开（公告）日： | 2010-09-15 |
| 发明（设计）人： | 张爱联;崔艳艳;罗进贤;张添元 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 海口翔翔专利事务有限公司 46001 | 代理人： | 莫臻 |
| 地址： | 571101 海*** | 国省代码： | 海南;66 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用毕赤 酵母 pgap 调控 表达 阿拉伯糖 异构酶 方法 | ||
1.一种用毕赤酵母pGAP调控表达L-阿拉伯糖异构酶的方法，其特征在于，其步骤如下：
1)、首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；
2)、在L-阿拉伯糖异构酶序列的3’末端融合His6标签，构建由pGAP调控L-阿拉伯糖异构酶基因的由G418抗性基因作为筛选标记的毕赤酵母表达载体，将这一载体转化毕赤酵母基因组，并将转化物涂布于含G418≥300μg/mL的G418-YPD平板上；
3)、从步骤2的G418-YPD平板上再挑选毕赤酵母重组子作为工程菌株；
4)、将步骤3获得的工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于28～30℃在生物反应器中发酵1～2d分泌表达L-阿拉伯糖异构酶；所述液体培养基是由以下组分组成：85％磷酸25～28ml/L、CaSO4·2H2O 0.8～1.2g/L、K2SO4 17～19g/L、MgSO4·7H2O 13～16g/L、KOH 3.5～4.5g/L、碳源15～45g/L、蛋白胨18～22g/L、Yeastextract 8～12g/L、PTM43～5ml/L；所述PTM4是由以下组分组成：CuSO4·5H2O 2.0g/L、NaI·2H2O 0.1g/L、MnSO4·H2O 3.0g/L、Na2MoO4·2H2O 0.2g/L、H3BO30.02g/L、CoCl2·6H2O 1.05g/L、ZnCl27.0g/L、Fe2(SO4)3·7H2O 22g/L、生物素0.2g/L、硫酸1ml/L。
2.根据权利要求1所述的用毕赤酵母pGAP调控表达L-阿拉伯糖异构酶的方法，其特征在于：所述碳源是甘油、油酸、山梨醇、葡萄糖、乳酸、甘氨酸、丙氨酸、海藻糖或甘露醇。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国热带农业科学院热带生物技术研究所，未经中国热带农业科学院热带生物技术研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201010184847.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
